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人源大麻素Ⅰ型受体文献资料
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人源大麻素Ⅰ型受体基因真核表达质粒的构建及表达
目的 构建人源大麻素Ⅰ型受体(human cannabinoid receptor 1,hCB Ⅰ)基因GV230真核表达质粒,并于HEK-293细胞中进行表达.方法 以人脑皮质细胞的总RNA为模板,扩增获得hCB Ⅰ基因,克隆至真核表达载体GV230,构建重组表达质粒GV230-hCB Ⅰ,筛选阳性克隆,脂质体瞬时转染HEK293细胞.置倒置荧光显微镜下观察,并采用激光共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)和Western blot法检测hCB Ⅰ基因在HEK293细胞中的表达.结果 重组表达质粒GV230-hCB Ⅰ经双酶切及测序鉴定,构建正确.转染48 h后,转染率约40％,CB Ⅰ蛋白主要于细胞膜分布及表达,且于相对分子质量约50 000处可见特异性条带.结论 成功构建了重组真核表达质粒GV230-hCB Ⅰ,并于HEK293细胞中表达,为进一步研究CB Ⅰ的生物学功能奠定了基础.
