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尼古丁上调星形胶质细胞内源性Cryab 抑制 Aβ聚集的研究
目的：研究尼古丁激活星形胶质细胞α7胆碱能受体（α7 nicotinic receptors ，7 nAChRs）上调内源性B-晶状体蛋白（αB-crystallin，Cryab）并抑制β淀粉样蛋白（Amyloid，Aβ）集聚的现象及其机制。方法分离24 h内新生乳鼠大脑皮质培养原代星形胶质细胞并鉴定；体外制备 Aβ1-42寡聚体；将细胞分为对照组、尼古丁组、α7 nAChRs阻断剂（methyllycaconitine，MLA）组、Aβ1-42组、尼古丁＋Aβ1-42组、PI3K信号通路阻断剂LY294002＋尼古丁＋Aβ1-42组。用蛋白印迹法（ Western blotting ）检测细胞内Cryab、P-Akt （ ser473）、Aβ寡聚体的表达水平。结果尼古丁可以显著上调星形胶质细胞内源性Cryab蛋白（P＜0．05）；尼古丁能够显著上调磷酸化Akt蛋白水平（P＜0．05）；在细胞裂解液及培养基中，尼古丁显著增强星形胶质细胞对Aβ聚集的抑制作用（P＜0．01）。结论尼古丁通过激活星形胶质细胞α7 nAChRs上调内源性Cryab从而抑制Aβ集聚；PI3K／Akt信号通路可能参与尼古丁激活星形胶质细胞α7 nAChRs上调内源性Cryab蛋白抑制Aβ集聚的过程。为进一步研究尼古丁抑制Aβ集聚的可能机制提供了实验基础。
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激活星形胶质细胞α7胆碱能受体后内源性Cryab蛋白的表达
目的:探讨尼古丁激活SD大鼠星形胶质细胞α7胆碱能受体(α7 nAChRs)后内源性B-晶状体蛋白(Cryab)表达.方法:分离24 h新生乳鼠大脑皮质,原代培养并鉴定为星形胶质细胞后,将培养第3～4代的星形胶质细胞分为正常对照组、尼古丁处理组和α7 nAChRs阻断剂(MLA)联合尼古丁处理组;正常对照组不加尼古丁和MLA,尼古丁处理组以1、5及10 μmol/L浓度的尼古丁处理星形胶质细胞6、12、18及24 h,MLA联合尼古丁处理组以0.05、0.1、0.15及0.2μmol/L浓度的MLA预先处理星形胶质细胞2h后,再加入尼古丁处理组佳浓度的尼古丁和佳培养时间培养细胞;运用蛋白印迹(Western blotting)方法检测3组星形胶质细胞内源性Cryab蛋白的表达.结果:与正常对照组比较,尼古丁处理组的星形胶质细胞内源性Cryab蛋白上调(P＜0.05);与尼古丁处理组比较,MLA联合尼古丁处理组的星形胶质细胞内源性Cryab蛋白上调受到明显抑制(P＜0.01).结论:尼古丁激活星形胶质细胞α7nAChRs可上调内源性Cryab蛋白表达,该表达可被MLA阻断.
