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胃癌干细胞制备方法及在胃癌侵袭转移中的机制
目的 探讨胃癌干细胞制备方法及其在胃癌侵袭转移中的机制.方法 建立胃癌细胞成球培养方法,采用球形克隆实验、平板克隆实验及裸鼠成瘤实验测定培养胃癌干细胞(GCSCs)及SGC7901细胞的致瘤性和侵袭性.通过Transwell迁移试验测定人胃癌SGC7901细胞株和GCSCs细胞在胃癌转移性中的作用.用基因芯片筛选出该细胞中高表达分子ANTXR2,分析其在干细胞侵袭转移中的作用.结果 (1)人胃癌SGC7901细胞株培养后开始贴壁生长,培养条件为RPMI-1640(10. 0% FBS);GCSCs细胞为悬浮生长,培养条件为无血清培养基,细胞贴壁生长后呈梭形的间质形态;(2)球形克隆:GCSCs细胞瘤球数量为(63. 92 ± 4. 51)个,显著多于人胃癌SGC7901细胞株的(6. 49±0. 70)个(P<0. 05);(3)平克隆实验:GCSCs细胞瘤球数量为(9. 61±1. 59)个,显著多于人胃癌SGC7901细胞株的(1. 78±0. 82)个(P<0. 05);(4)成瘤实验:裸鼠体内移植1×104个球细胞即可发生肿瘤,GCSCs细胞移植瘤直径,显著大于人胃癌SGC7901细胞株(P<0. 05);(5)Transwell迁移:GCSCs细胞穿过基底膜细胞数为(171. 92±12. 31)个,显著高于人胃癌SGC7901细胞株的(85. 39±4. 91)个(P<0. 05);结晶紫染色可以看出,GCSCs细胞穿过基底膜细胞数多于人胃癌SGC7901细胞株;(6)流式细胞术检测人胃癌SGC7901细胞株中ANTXR2阳性细胞比例占4. 98% ,GCSCs细胞中ANTXR2阳性细胞比例占85. 48% .对ANTXR2阳性的胃癌组织切片采用实时定量PCR方法测定显示:ANTXR2与干细胞标志CD44有共定位现象.结论 采用成球培养法能成功分离/富集胃癌干细胞,具有多向分化、克隆及成瘤能力,ANTXR2在胃癌干细胞侵袭转移中发挥了重要作用,可以作为胃癌预后指标.
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人胃癌细胞系SGC-7901干细胞样细胞的富集与鉴定
[目的]富集/分离人胃癌细胞系SGC-7901干细胞样细胞,并评价其干细胞生物学特性.[方法]分别采用成球条件培养法和流式侧群(SP)细胞分选法分离SGC-7901干细胞样细胞,通过克隆形成实验、体内成瘤实验、化疗耐药实验鉴定SGC-7901细胞球、SP细胞的干细胞特性.[结果](1)成球条件培养法:在含有表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、B27、N-2的无血清条件培养基及超低吸附培养板的培养条件下,SGC-7901细胞能够成球悬浮生长,且可连续传代;克隆形成实验结果显示:SGC-7901细胞球克隆数高于SGC-7901细胞;体内成瘤实验显示:裸鼠移植相同数量级的SGC-7901细胞球和SGC-7901细胞,SGC-7901细胞球成瘤率高于SGC-7901细胞;化疗耐药实验结果显示:在相同浓度下,3种化疗药(5-氟尿嘧啶、盐酸多柔比星、顺铂)对SGC-7901细胞球的平均抑制率均低于SGC-7901细胞.(2)侧群分选法:Hoechst33342浓度为2.5μg/mL,SGC-7901细胞SP细胞分选率为4.74％,维拉帕米对照组SP细胞分选率为0.19％,差异显著(P<0.01);克隆形成实验与体内成瘤实验显示:SP与非侧群(non-SP)细胞克隆形成能力与致瘤性无显著性差异(P>0.05).[结论]在超低吸附培养板和无血清条件培养基培养的SGC-7901细胞球具有肿瘤干细胞特性;SGC-7901细胞存在着SP亚群,但其肿瘤干细胞特性不明显.
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3-D成球培养MSCs的研究进展及临床应用前景
目的 总结近年来3-D成球培养MSCs的研究进展及临床应用前景.方法 广泛查阅国内外3-D成球培养MSCs的相关研究,重点关注3-D培养模式下MSCs细胞球的形成机制,3-D培养的MSCs细胞球与传统贴壁培养的MSCs在生物功能上存在的差异,以及造成这些差异的生物学机制,探讨MSCs细胞球的临床应用前景.结果 与传统贴壁培养的MSCs相比,3-D培养的MSCs细胞球在抗凋亡、多向分化、旁分泌、抗炎等多项生物功能上明显增强,其机制与细胞骨架的改变、细胞接触的增加和低氧微环境的刺激有关,在动物实验中对于难愈性创面的修复、缺血组织的修复、组织重塑具有显著治疗效果,有广阔临床应用前景.结论 3-D培养的MSCs细胞球较传统贴壁培养的MSCs具有更强的生物功能和治疗效果,可成为临床上优化干细胞疗法、提高其治疗效果的一种手段.
