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体外原代培养脐带基质间充质细胞和人皮肤成纤维细胞
目的 探讨体外原代培养脐带基质间充质细胞(UMC)和人皮肤成纤维细胞(HSF)的方法.方法 用Ⅳ型胶原蛋白酶、Ⅰ型脱氧核糖核酸酶和0.25％胰蛋白酶消化法原代分离培养UMC细胞,用组织块贴壁法原代分离培养HSF细胞,镜下观察细胞的培养过程和生长状态.结果 脐带组织分离培养第3天,有少量UMC贴壁生长,细胞膜周围有折光性,形态类似于成纤维细胞；皮肤组织块贴壁培养第7天,有HSF爬出,呈长梭形、不规则三角形.随着细胞培养时间延长,UMC和HSF数量逐渐增多细胞生长状态良好.结论 应用酶消化法和组织块贴壁法可成功分离培养出UMC和HSF.
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Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因重编程人皮肤成纤维细胞的实验研究
目的 探讨利用Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因能否将人皮肤成纤维细胞(HSF)编程为诱导性多潜能干细胞(iPS).方法 ①利用组织块贴壁法原代分离培养HSF细胞.②包装生产携带Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因的逆转录病毒上清液感染HSF细胞.③病毒感染后HSF细胞培养,镜下观察HSF细胞形态学变化.④应用细胞碱性磷酸酶(AP)染色检测细胞基因表达量和体内分化畸胎瘤实验对细胞生物学特性进行鉴定.结果 原代HSF细胞编程后形态类似于胚胎干细胞,细胞AP染色阳性,内源多能基因Oct4、Sox2、Nanog、Rex1表达量增高,细胞体内可分化为畸胎瘤.结论 利用Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因可将HSF细胞编程为iPS细胞.
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利用SOX2、Klf4、OCt4、c-Myc基因将脐带基质间充质细胞编程为多潜能干细胞
目的:探讨利用Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因将脐带基质间充质细胞(UMC)编程为多潜能干细胞(iPS)的可能性.方法:原代分离培养UMC细胞,包装生产逆转录病毒感染UMC细胞,将感染后细胞接种到饲养层细胞培养,镜下观察细胞形态学变化.对编程后细胞进行碱性磷酸酶(AP)染色、检测细胞基因表达量和体內分化畸胎瘤实验.结果:获得原代UMC细胞,细胞被编程后形态类似于胚胎干细胞,细胞AP染色阳性,內源多能基因Oct4、Sox2、Nanog、Rcx1表达量增高,外源编程基因Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc表达沉默,细胞体內分化为畸胎瘤.结论:利用Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因能将UMC细胞编程为iPS细胞.
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Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因编程脐带基质间充质细胞
目的 探讨利用Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因将脐带基质间充质细胞(UMC)编程为多潜能干细胞(iPS).方法 原代分离培养UMC细胞,包装生产逆转录病毒感染细胞,将感染后细胞接种到饲养层细胞培养,镜下观察细胞形态学变化.对编程后细胞进行碱性磷酸酶(AP)染色、检测细胞内源多能基因表达量和体内分化畸胎瘤实验.结果 原代获得UMC细胞,被编程细胞形态类似于胚胎干细胞,AP染色阳性,内源多能基因Oct4、Sox2、Nanog、Rex1表达量增高,体内分化为畸胎瘤.结论 利用Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因可将UMC细胞编程为iPS细胞.
