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OVA12蛋白文献资料
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一种新的肿瘤相关蛋白-OVA12和抗体制备及其初步应用
目的制备原核表达的OVA12纯化蛋白,研究正常人与肿瘤患者血清中抗OVA12抗体水平的差异.方法克隆OVA12的cDNA至pGEMT载体中,经测序确证后,将该基因插入原核表达载体pET32a(+)中,并转化至E.coli表达菌BL21(DE3)中,诱导6×His融合蛋白表达,经Ni2+亲和层析及胶回收技术纯化蛋白,并将蛋白免疫动物制备兔抗OVA12蛋白抗体;采用ELISA、Dot blot、Western blot法比较正常人及肿瘤患者血清中抗体水平的差异.结果获得纯化OVA12蛋白及高滴度的兔抗血清;ELISA法测定显示,正常人组OD均值为0.17±0.07,肿瘤患者组OD均值为0.32±0.15,两组之间有显著性差异(P＜0.0001),并选择其中样本经Western blot、Dot blot加以进-步证实.结论成功克隆OVA12基因,并获得纯OVA12蛋白和高滴度的兔抗血清;ELISA等方法测定肿瘤患者与正常人血清中OVA12抗体水平有明显差异,为临床检测的应用奠定基础.
