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分子佐剂C3d增强hCGβ基因免疫体液免疫效应
目的:该实验室前期工作已成功构建真核表达质粒pcDNA3-hCGβ、pcDNA3-hCGβ-C3d3且证明其能在真核表达系统中有效表达.通过动物DNA免疫,以期证实分子佐剂C3d增强免疫避孕疫苗免疫原性.方法:抽提与纯化pcDNA3、pcDNA3-hCGβ、pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒,进行动物DNA免疫.免疫剂量分别为5、10、20 pmol,共免疫2次,每次间隔3周.末次免疫后6周采血,用间接ELISA分析实验动物外周血抗hCGβ抗体效价.结果:C3d分子佐剂能明显提高抗hCGβ抗体滴度;且其作用呈剂量依赖性.结论:分子佐剂确实能增强hCGβ免疫原性;此结果将有助于免疫避孕疫苗的技术进步及实际应用.
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hCGβ-C3d3融合蛋白免疫BALB/c小鼠及其抗血清对hCG诱导鼠子宫增重的抑制效应
通过分子佐剂C 3d 3增强hCGβ避孕疫苗的免疫原性.方法:采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达质粒phCMV1-6Hi s-hCGβ-C3d3和phCMV1-6Hi s-hCGβ,在CH0细胞中获得稳定、高效表达的重组蛋白,并用镍柱和凝胶过滤层析对其进行分离、纯化.分别用hCGβ-C3d 3融合蛋白和单用hCGβ间隔4周两次免疫生育期雌性BALB/c小鼠,ELISA测定血清中抗hCGβ抗体滴度,并对各组小鼠产生的抗血清拮抗hCG诱导的小鼠子宫增重效应进行比较.结果:C 3d 3使hCGβ蛋白疫苗的免疫原性增强1 995倍,hCGβ-C 3d3融合蛋白免疫小鼠产生的抗血清具有很强的抑制小鼠子宫增重作用.结论:通过分子佐剂C 3d 3可以大幅提高机体对hCGβ的体液免疫应答能力,hCGβ-C 3d 3融合蛋白免疫小鼠产生的抗血清对hCG的生物学作用具有更强的抑制效应.
