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血浆miRNA-200b及miRNA-21在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义
目的:探讨血浆微小核糖核酸-200b(miRNA-200b)及微小核糖核酸-21(miRNA-21)在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达及其临床意义.方法:采用RT-PCR检测162例EOC患者、120例上皮性卵巢良性肿瘤患者(良性组)和108例健康女性(对照组)血浆miRNA-200b、miRNA-21及CA125表达水平,分析miRNA-200b及miRNA-21表达水平与EOC临床病理特征的关系.应用ROC曲线评价miRNA-200b、miRNA-21及CA125对EOC诊断的灵敏度和特异度,多元Logistic回归模型分析三项指标与EOC的关系.Pearson相关分析EOC患者血浆miRNA-200b与miRNA-21、CA125的相关性.结果:EOC组血浆miRNA-200b、miRNA-21及CA125表达水平均明显高于良性组和对照组[miRNA-200b(2-ΔΔCt):3.52 ±1.03 vs 1.26 ±0.37和1.15±0.34;miRNA-21(2-ΔΔCt):2.32±0.45 vs 1.18±0.32和1.04±0.28;CA125(U/ml):78.64±30.57 vs 26.27±11.36和21.53± 9.45,均 P<0.01].血浆 miRNA-200b、miRNA-21、CA125及三项联合诊断 EOC 的 AUC(95% CI)分别为0.896(0.834 ~0.958)、0.792(0.731~0.847)、0.908(0.841 ~0.973)、0.947(0.883 ~0.995),其佳截值分别为2.08、1.46、52.84 U/ml.Logistic回归分析显示,血浆miRNA-200b、miRNA-21及CA125水平升高是EOC发生的独立危险因素[OR(95% CI)=2.518 (1.563~3.547),OR(95% CI)=1.724(1.103~2.528),OR(95% CI)=2.316(1.347 ~3.419)].EOC患者血浆miRNA-200b与CA125的相关性好(r=0.702,P<0.01).结论:血浆miRNA-200b及miRNA-21可作为早期诊断EOC的分子标志物,其诊断效能与CA125相当,三项联合应用有望提高EOC早期诊断的准确性.
关键词： 微小核糖核酸-124 核糖核酸-21 上皮性卵巢癌 敏感性与特异性 -
miR-124靶向抑制NFATc1调控小鼠C3H10T1/2细胞软骨分化的研究
目的 研究miR-124是否通过调控预测的靶基因活化T细胞核因子c1(NFATc1)表达调节小鼠C3H10T1/2细胞的软骨分化.方法 培养C3H10T1/2细胞,行软骨诱导分化,采用实时定量PCR和蛋白免疫印迹法检测NFATc1和软骨标记基因Aggrecan、CollagenⅡ、Collagen X mRNA及蛋白的表达水平.使用在线靶基因预测软件预测NFATc1 mRNA的3’端非翻译区(3'UTR)结合位点,构建NFATc1 3'UTR野生型及突变型的荧光素酶报告载体,检测双荧光素酶报告基因,观察miR-124对NFATc1 3'UTR荧光素酶活性的影响.转染miR-124模拟物或抑制物并进行软骨诱导,观察miR-124对NFATc1的调控作用.结果 与诱导前比较,成软骨诱导组软骨分化相关基因Aggrecan、Col2a1和Col10a1 mRNA表达水平升高(P均＜0.01);Sox9和NFATc1 mRNA表达水平随着软骨分化进展而增加(P均＜0.001);Col2a1、Sox 9和NFATc1蛋白呈逐渐增强表达,而肥厚性标记Col10a1蛋白显示较稳定表达.NFATc1 mRNA的3'UTR与miR-124的种子区存在理论上的互补碱基配对序列.转染NFATc1野生型质粒的C3H10T1/2细胞中,加入miR-124模拟物者的荧光素酶活性低于加入miR-124抑制物者,加入miR-124抑制物者的蛋白表达强于加入miR-124模拟物者(P均＜0.05);转染NFATc1突变型质粒的C3H10T1/2细胞中,加入miR-124模拟物与加入miR-124抑制物的荧光素酶活性无变化(P＞0.05).蛋白免疫印迹法与实时定量PCR结果均显示,转染miR-124组与si-NFATc1组的NFATc1表达水平低于Control组(P均＜0.01),miR-124组与si-NFATc1组的NFATc1表达水平相近(P＞0.05).过表达miR-124后,NFATc1大约降低了60％,而这种降低可被miR-124抑制物逆转.转染N FATc1野生型质粒的miR-124模拟物组的NFATc1荧光素酶活性减低(P均＜0.05),转染NFATc1突变型质粒的miR-124模拟物组NFATc1荧光素酶活性无变化(P均＞0.05).结论 miR-124通过抑制靶基因NFATc1的表达调控C3H10T1/2细胞软骨分化.
关键词： 微小核糖核酸-124 骨髓间充质干细胞 软骨分化 活化T细胞核因子c1 -
小鼠皮层神经元机械损伤后miR-124的动态变化及意义
目的 观察体外培养小鼠皮层神经元机械损伤后微小核糖核酸-124 (miR-124)的表达变化,初步探讨miR-124对小鼠创伤性脑损伤后神经轴突再生与修复可能的影响.方法 孕15 ～ 18 dC57BL/6种孕鼠胚胎脑皮质层神经元体外培养7d,以10 μL移液器塑料滴头在培养皿内划割,造成机械性损伤,伤后不同时间点(1h,6h,12 h,24h,72 h,144 h)分别采用实时定量聚合酶链法(RT-PCR)检测miR-124和蛋白质印记法(Western Blot)检测神经纤毛蛋白(Nrp-1)、微管相关蛋白(Tau)、生长相关蛋白43(Gap-43)的表达水平.然后用miR-124模拟物和抑制剂分别对体外培养的皮层神经元进行干预,观察miR-124表达量的改变对实验的影响.结果 神经元机械损伤后miR-124和Nrp-1、Tau、Gap-43的表达均显著升高(P＜0.05),且存在一定的正相关性.用miR-124模拟物和抑制剂分别显著升高和降低miR-124的表达后,Nrp-1、Tau、Gap-43表达显著下降,其中抑制剂组下降较模拟物组明显(P＜0.05).结论 创伤区miR-124的适度高表达可能与轴突再生有密切联系,这为本课题组今后尝试梯度调控miR-124以调节神经轴突再生与修复提供了实验依据.
关键词： 机械损伤 微小核糖核酸-124 轴突再生修复 -
小鼠创伤性脑损伤后微小RNA-124变化及其与轴突再生的关系
目的 探讨小鼠创伤性脑损伤(TBI)后微小RNA-124(miRNA-124)的表达变化及其与轴突再生的关系. 方法 将91只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为TBI组63只和对照组28只.TBI组制作控制性脑皮质撞击伤模型,分别于TBI后12 h、1,3,7,14,21,28 d处死,取损伤区脑组织用于实验;对照组仅去骨窗,不予撞击损伤.分别采用HE染色进行损伤区观察,实时PCR检测miRNA-124的表达变化,Western blot和免疫组织化学染色检测轴突标志物神经纤毛蛋白1(Nrp-1)、生长相关蛋白43(GAP-43)、微管相关蛋白(Tau)的表达水平. 结果 通过对TBI组小鼠行为及HE染色结果的观察,表明造模成功.通过PCR法测得miRNA-124的相对表达量在伤后3d达到高峰(3.80 ±0.22),Western blot法测得Nrp-1相对表达量在伤后3d达到高峰(2.006±0.179),Tau在伤后14 d表达量达到高峰(2.063 ±0.172),Gap-43在伤后12 h即持续高表达(1.355 ±0.093) (P ＜0.05).创伤后由于直接损伤作用和损伤区水肿,轴突标志物阳性细胞数量在ld时少,之后缓慢恢复,14,21和28 d时数量达到TBI前水平,但形态较对照组发生明显改变.虽然TBI后ld损伤区轴突标志物阳性细胞数量减少,但此时,miRNA-124和Nrp-1、Tau、Gap-43表达量均较对照组有显著升高(P＜0.05).结论 小鼠TBI后损伤区miRNA-124的表达增加可能与轴突再生有密切联系.
关键词： 脑损伤 轴突 微小核糖核酸-124
