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利用寡核苷酸微阵列芯片分析ERRα过度表达对子宫内膜癌HEC-1A细胞转录因子活性的影响
目的:讨论过度表达雌激素受体相关受体(ERRα)对子宫内膜癌细胞HEC-1A中不同转录因子转录活性的影响.方法:构建带有绿色荧光蛋白和G418耐药基因筛选标记的真核表达质粒pEGFP-N1-3FLAG-ERRα,将质粒转染子宫内膜癌细胞株HEC-1A,荧光显微镜下检测并通过G418高浓度筛选、低浓度维持建立ERRα稳定高表达的子宫内膜癌细胞株HEC-1 A/ERRα.分别抽提子宫内膜癌细胞HEC-1A、转染质粒空载体的HEC-1 A/空载体细胞,ERRα过度表达的HEC-1 A/ERRα细胞的核蛋白.将核蛋白与CY3、CY5双色标记的326检测信号通道的转录因子芯片(寡核苷酸微阵列芯片)杂交并通过双色共聚焦激光扫描仪分析.结果:转染ERRα真核表达质粒后,与HEC-1A细胞和转染载体的HEC-1A/空载体细胞对比,子宫内膜癌细胞HEC-1 A/ERRα中ERRα的mRNA和蛋白表达明显增加.HEC-1A-ERRα细胞株与HEC-1A/空载体细胞株转录因子活性比较显示7个转录位点的活性发生显著改变,其中调控SREBP,AP-1,c-Myc,Usf-1/2转录因子的结合位点活性下调,而调控RFX-1,PPAR-α,PPAR-γ的转录因子的结合位点活性上调.而在HEC-1A/空载体细胞株和HEC-1A细胞株中未检出上述7种转录因子的差异表达.结论:①寡核苷酸微阵列芯片是一种有效的筛选转录因子的工具;②ERRα过度表达下调子宫内膜癌细胞HEC-1A中转录因子SREBP,AP-1,c-Myc,Usf-1/2的转录活性,上调RFX,PPARα,PPAR^γ的转录活性.
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卵巢癌细胞侵袭转移相关转录因子表达分析
目的:分析并比较卵巢癌细胞中与肿瘤转移、侵袭相关的转录因子.方法:采用细胞划痕及小室跨膜实验比较卵巢癌细胞HO-8910及其高转移株HO-8910PM的转移侵袭能力差异；采用高通量转录因子活性检测芯片(DNA/蛋白结合芯片)分析并比较两种细胞中转录因子的活化情况,明确与肿瘤侵袭、转移相关表达的转录因子；用转录因子酶联免疫活性分析方法验证芯片检测结果.结果:细胞划痕实验及侵袭实验表明HO-8910PM比HO-8910细胞转移侵袭能力强,在345个转录因子中共筛选出与肿瘤侵袭、转移相关的31个表达差异转录因子.HO-8910PM细胞与HO-8910细胞相比,表达上调的有13种,下调的有18种.v-Maf仅表达于HO-8910PM,HLF仅表达于HO-8910.结论:v-Maf、HLF等31种转录因子可能参与了卵巢癌侵袭转移的相关机制.
