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中蜂囊状幼虫病毒LN-QY株VP2结构蛋白的基因分析及B细胞抗原表位预测
目的 预测中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)LN-QY 株 VP2 蛋白的空间结构及其B细胞抗原表位.方法 将已感染CSBV LN-QY 株的RNA作为模板,进行RT-PCR扩增该毒株结构蛋白 VP2 基因,再与pMD18-T载体连接,之后转化大肠杆菌DH5α感受态,对经EcoRⅠ和BamH I双酶切鉴定为阳性的重组质粒进行测序,通过序列比对,获得LN-QY株VP2的核苷酸序列和推导的氨基酸序列,建立VP2结构蛋白的3D模型,在此基础上,应用DNAStar软件中的Protean模块综合分析结构蛋白的柔性区域、亲水性、表面可能性以及抗原指数等参数.结果 VP2结构蛋白的空间构象比较规则,其可能的B细胞抗原表位区域位于178-184,144-199,211-217氨基酸区段.结论 本研究为CSBV LN-QY 株VP2蛋白表位疫苗的设计以及血清诊断试剂盒的研制奠定了理论基础.
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人类微小病毒B19结构蛋白VP2的重组表达及单克隆抗体的制备
目的: 制备特异性的抗人类微小病毒B19单克隆抗体(mAb)杂交瘤.方法:采用PCR从B19病毒感染患者的血清标本中扩增编码VP2蛋白的基因,经克隆、测序确认后,再分别亚克隆至原核表达载体和真核表达载体.以从SDS-PAGE凝胶中回收的原核表达产物免疫BALB/c小鼠,制备可分泌特异性B19mAb的杂交瘤细胞.以真核表达载体转染CHO细胞后,筛选单细胞表达克隆,将真核表达产物与用原核表达产物为免疫原制备的mAb反应.结果:从患者血清标本中扩增出了1 665 bp长的DNA,测序结果证实为vp2基因.将该基因克隆至原核表达载体中后,在大肠杆菌中获得了表达.表达产物经SDS-PAGE后,在Mr约为6 000处可见1条明显的表达带.Western blot的结果表明,该电泳带与B19患者的血清呈特异性免疫反应.以从SDS-PAGE凝胶中回收的表达产物为免疫原,免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、克隆化,获得2株分泌特异性的抗VP2 mAb的杂交瘤细胞.以这2株杂交瘤细胞制备的腹水可与SDS-PAGE凝胶Mr 6000的蛋白条带也出现很强的免疫反应.用ELISA证明以Vp2基因真核表达载体转染的CHO培养上清,也与筛选到的mAb呈阳性反应.结论:成功地制备抗VP2的mAb,为进一步研制可用于B19病毒感染早期免疫诊断试剂盒奠定了基础.
