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骨形态发生蛋白受体1b文献资料
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BMPR1b-siRNA对人骨髓间充质干细胞成骨分化及Smads通路的影响
目的 探讨BMPR1b对人骨髓问充质干细胞成骨分化及Smads通路的影响.方法 构建BM-PR1b特异性siRNA质粒,利用脂质体Lipo fectamineTM2000将BMPR1 b-siRNA质粒转入hBMSCs,采用实时荧光定量PCR检测BMPR1b表达水平.利用四甲基偶氮唑蓝实验检测hBMSCs细胞增殖活性和碱性磷酸酶活性,茜素红染色鉴定hBMSCs成骨分化能力.利用实时荧光定量PCR及Western blot法检测成骨标志基因ALP、骨钙素、骨桥蛋白、Smads通路关键基因Smad1、Smad4水平.结果 成功分离培养hBMSCs细胞.干扰组BMPR1bmRNA表达水平明显低于阴性对照组及空白组,差异有统计学意义(P＜0.05),阴性对照组与空白组BMPR1bmRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).MTT实验结果显示,沉默BMPR1b后,可明显抑制hBM-SCs生长与增殖.沉默BMPR1b后可下调hBMSCs细胞ALP活性.茜素红染色结果显示,沉默BMPR1b后可明显降低hBMSCs细胞钙化程度.qRT-PCR及Western blot结果显示,沉默BMPR1b后可明显下调ALP、骨钙素、骨桥蛋白表达,下调Smad1、Smad4表达.结论 沉默BMPR1b后可明显抑制hBMSCs细胞成骨分化,推测其机制可能与抑制Smads通路有关.
关键词： RNA干扰 骨形态发生蛋白受体1b 人骨髓间充质干细胞 成骨分化 Smads通路
