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生长相关蛋白在脊髓源性神经干细胞向神经主细胞分化过程中的表达
目的:探讨脊髓源性神经干细胞向神经元诱导分化过程中生长相关蛋白43的表达,分析其对脊髓损伤修复的主导作用.方法:实验于2003-03/09在中国医科大学实验动物中心完成.取15只孕14 d的胎鼠,自胎鼠的脊髓区提取神经干细胞,经培养及神经巢蛋白免疫细胞化学鉴定,观察在神经干细胞定向诱导分化为神经元过程中,生长相关蛋白43于不同时间点的形态学表达.培养液为添加B27(2%)、碱性成纤维细胞生长因子(20 mg/L)、表皮细胞生长因子(20mg/L)的无血清培养基DMEM/F12.置于37℃、体积分数为0 05的COz培养箱中悬浮培养,观察其生长情况,每3天换液1次,共培养5次.分别于分化1,2,4,8 d取出载玻片,对生长相关蛋白的表达进行免疫组化检测.总细胞和阳性细胞在显微镜下计数.结果:15只胎鼠的脊髓源性神经干细胞全部进入结果分析.①神经干细胞的培养情况:培养24 h后,可见神经球;第2天时,神经球数目增多,呈桑椹状,折光性强,死细胞无光泽,仅有轮廓.②神经干细胞的鉴定结果:免疫细胞化学染色可见神经球内圆形细胞呈神经巢蛋白抗原强阳性,核未着色.神经干细胞定向分化后,细胞逐渐贴壁,到第4,8天时,细胞逐渐变大,突起变长,偶见多个突起.神经元特异性烯醇化酶阳性的神经元,胞浆及核膜出现棕色阳性反应,细胞核大而圆,无着色.细胞连续计数共712个,其中神经元特异性烯醇化酶阳性细胞296个,比例为41.57%.③神经干细胞分化过程中生长相关蛋白表达的测定:神经干细胞分化第1天,胞质内出现生长相关蛋白,第4天表达增强,于核周及突起中明显,逐渐向胞膜转移,并且长的突起与其他细胞的突起之间形成连接,至分化第8天时这种突起生长停止,神经干细胞分化为成熟的神经元细胞,生长相关蛋白反应减弱并消失.细胞连续计数共736个,其中生长相关蛋白阳性细胞246个,比例为33.42%.结论:在神经干细胞分化为神经元的过程中,生长相关蛋白基因呈一过性表达,参与引导突起的生长并发挥促进作用.
关键词： 干细胞 细胞分化 神经组织蛋白质类/分析 神经系统/细胞学 -
实验性头颅侧向旋转脑弥漫轴索损伤神经丝蛋白亚单位含量变化
目的: 探讨实验性头颅侧向旋转脑弥漫轴索损伤(DAI)中神经丝(NF)蛋白亚单位含量变化. 方法: SD大鼠24只,等分为三个损伤组(伤后2, 12, 24 h)及一个对照组,对损伤组制作头颅侧向旋转脑DAI模型. 用Western印迹技术进行免疫活性定量测定,以检测全部损伤及对照组大鼠脑干组织NF蛋白亚单位NF68的含量. 结果: 脑干NF68含量在伤后2 h倾向下降,12 h显著减少,继续降低至24 h;其降解产物NF56, NF52在伤后2 h～12 h趋于增加,24 h提高至显著水平. 结论: 头颅侧向旋转DAI后脑干神经丝产生磷酸化反应,引起NF68水解,造成NF68含量减少. 提示神经丝蛋白亚单位水解是DAI中神经丝结构破坏的重要原因.
