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半乳糖基化壳聚糖-聚乙烯亚胺递送siRNA对肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu中MRE11表达的影响
背景:壳聚糖是一种常用的非病毒载体,具有良好生物相容性、生物可降解性、低毒等优点,但其基因递送能力相对较弱,常需要进行结构衍生修饰.目的:观察半乳糖基化壳聚糖-聚乙烯亚胺(LA-CS-PEI)在肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu中递送siRNA的能力及对减数分裂重组蛋白11(MRE11)表达的影响.方法:①将肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu或人肝细胞HL-7702分别与0,10,20,40,80,100 mg/L的LA-CS-PEI或壳聚糖-聚乙烯亚胺共培养24 h,检测细胞存活率;②将LA-CS-PEI与siRNA-FAM分别以0,2,4,8,16,32的质量比混合,制备复合转染颗粒.以复合转染颗粒转染肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu,48,72,96 h后,以转染效率筛选佳质量比与转染时间,进行下步实验;③以复合转染颗粒、LA-CS-PEI、siRNA分别转染肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu 48 h后,以未转染的细胞为空白对照,检测MRE11基因及蛋白的表达.结果与结论:①与壳聚糖-聚乙烯亚胺相比,LA-CS-PEI毒性更低,且当LA-CS-PEI质量浓度高达100 mg/L时,仍表现出很低的细胞毒性;②LA-CS-PEI与siRNA-FAM质量比为4和8时转染效率均达95%以上,入胞效率极高,转染48 h转染效果好,所以后续实验选择质量比为8,转染时间为48 h的复合转染颗粒;③复合转染颗粒组MRE11基因及蛋白表达低于LA-CS-PEI组、siRNA组、空白对照组(P<0.05);④结果表明,LA-CS-PEI能实现siRNA的有效递送,并能沉默肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu中的MRE11基因.
