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CD133+卵巢癌干细胞样细胞在血管内皮细胞中的分化
背景：大量研究证实，新生血管形成在肿瘤的生长、浸润以及转移过程中发挥重要作用。目的：探讨CD133+卵巢癌干细胞样细胞向血管内皮细胞分化的特点。方法：通过无血清培养方法从卵巢癌A2780细胞株中成功诱导出CD133+卵巢癌干细胞样细胞，在体外接种于铺或不铺Matrigel基质胶的96孔板内，观察不同时间点CD133+卵巢癌干细胞样细胞和人脐静脉内皮细胞形成管腔样结构能力。通过裸鼠皮下移植实验，免疫荧光法观察CD133+卵巢癌干细胞样细胞在卵巢癌血管新生中的作用。结果与结论：CD133+卵巢癌干细胞样细胞和人脐静脉内皮细胞(阳性对照)在未铺 Matrigel基质胶上并不能形成相应的管腔结构，且不表达内皮细胞标志物 CD31，在 Matrigel 基质胶上能够形成相对稳定的管腔结构， CD31表达明显。CD133+卵巢癌干细胞样细胞接种裸鼠皮下成瘤后，可观察到肿瘤组织中有人源性CD31的表达。结果表明CD133+卵巢癌干细胞样细胞能够分化为血管内皮细胞，参与肿瘤血管重建。
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IGF信号轴在卵巢癌干细胞样细胞增殖状态转换及预防卵巢癌复发中的作用
目的:探究胰岛素样生长因子(IGF)信号轴在促进卵巢癌干细胞样细胞增殖和抗凋亡中的作用,探讨基于IGF信号轴的IGF-1R抑制剂的靶向治疗和寻求降低卵巢癌化疗后复发的可能途径.方法:采用CD117+ CD44+ A2780卵巢癌细胞株,使用免疫细胞化学的方法检测IGF信号轴中IGF-1、IGF-2和IGF-1R在CD117+ CD44+ A2780细胞中的表达;利用MTT法检测IGF-1对CD117+ CD44+ A2780细胞的促增殖活性,配制IGF-1的质量浓度分别为10、25、40、55 ng· ml-1,另设空白对照,从中筛选出加入外源IGF-1的适宜质量浓度用于后续实验中;再将实验分为3组,即IGF-1刺激组、NVP抑制组和空白组.通过流式细胞术检测3组细胞在药物处理48 h后的细胞周期分布和凋亡率情况.结果:IGF信号轴组件IGF-1、IGF-2和IGF-1R均表达在CD117+ CD44+ A2780细胞的细胞膜上和细胞质中;MTT检测发现当外源IGF-1质量浓度为40 ng·ml-1时对CD117+ CD44+ A2780细胞的促分裂增殖作用明显;IGF-1刺激组较空白组增殖明显活跃,凋亡率降低(P ＜0.05);NVP抑制组较空白组增殖明显减少,凋亡率增高(P＜0.05).结论:IGF信号轴与卵巢癌化疗后的复发密切相关,IGF-1在卵巢癌干细胞样细胞转换增殖状态和对抗凋亡中发挥着重要作用;NVP阻断IGF-1R的作用可有效抑制卵巢癌干细胞样细胞从休眠状态启动分裂增殖;IGF信号轴组件可作为卵巢癌治疗及化疗后预防复发的靶点.
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DFOG对卵巢癌OVCAR3源性球细胞迁移和Twist1/FoxM1表达的影响
目的 :检查金雀异黄素(genistein,GEN)及其新型合成类似物7-二氟甲氧基-5,4'-二-正辛烷氧基金雀异黄素(7-difluoromethoxyl-5,4'-di-n-octyl genistein,DFOG)对人卵巢癌OVCAR3源性球细胞迁移和Twist1/FoxM1蛋白表达的作用.方法 :Transwell小室细胞迁移试验检测细胞迁移率.蛋白质印迹分析细胞Twist1和FoxM1蛋白表达水平.结果 :与OVCAR3细胞相比,OVCAR3源性球细胞迁移率更高.GEN(40μM)或DFOG(5μM和10μM)抑制OVCAR3源性球细胞迁移.此外,GEN(40μM)或DFOG(5μM和10μM)平行地下调Twist1和FoxM1蛋白表达.结论 :GEN及其类似物DFOG抑制OVCAR3源性球细胞体外迁移与其抑制Twist1和FoxM1蛋白表达相关.
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CD133+卵巢癌干细胞样细胞向血管内皮细胞分化的实验研究
目的 研究CD133+卵巢癌干细胞样细胞(ovarian cancer stem-like cells,OCSLCs)向血管内皮细胞的分化.方法 通过无血清培养方法诱导卵巢癌A2780细胞株来源的CD133+ OCSLCs;体外观察其在Matrigel基质胶上向血管内皮细胞分化的生物学行为,RT-PCR和Western blot检测其成管后CD31的表达;通过裸鼠皮下移植瘤实验,免疫荧光法观察CD133+ OCSLCs在卵巢癌血管新生中的作用.结果 成功诱导出CD133+ OCSLCs;体外成管实验结果显示CD133+OCSLCs在Matrigel基质胶上具有成管能力,6h管腔样结构形成为明显;免疫荧光、RT-PCR和Western blot证实,OCSLCs成管后表达CD31内皮细胞标记物(P＜0.01);CD133+ OCSLCs接种裸鼠皮下成瘤后,通过免疫荧光可观察到人源性肿瘤微血管的形成.结论 CD133+ OCSLCs具有向血管内皮细胞分化的潜能.
