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细胞培养:提取文献资料
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许旺细胞提取与纯化的新方法
背景:许旺细胞移植可改变损伤局部的微环境,有利于神经创伤的修复,获取大量高纯度、具有增殖活性的许旺细胞是研究的关键.目的:探求一种简单且快速提取和纯化许旺细胞的方法.方法:实验组大鼠在无菌条件下切断坐骨神经远端,使坐骨神经在体内预变性;对照组大鼠的坐骨神经不予任何处理.术后7 d切取两组坐骨神经,采用混合酶消化、组织块移植法提取许旺细胞:通过低酶消化、2次接种差速贴壁法分离纯化许旺细胞.相差显微镜下观察细胞形态,并行免疫荧光染色鉴定:计算细胞纯度:MTT法检测细胞增殖能力.结果与结论:实验组培养第7天可见典型呈双极或三极的许旺细胞,细胞间建立连接:对照组细胞突起较短,与周围细胞较少关联.S-100免疫荧光染色后,细胞呈阳性绿色表达.实验组细胞增殖较快,第15天迅速形成漩涡状,成纤维细胞数量相对较少,细胞纯度达96.1%;对照组细胞在培养过程中增殖较缓慢,成纤维细胞数量多,细胞纯度较低.MTT法检测结果显示,原代培养时两组许旺细胞增殖能力均较弱;传代后与对照组比较,实验组许旺细胞增殖能力明显增强(P<0.05或0.01),第三四代达峰值.结果证实体内预变性、体外混合酶消化、组织块移植结合低酶消化、双差速贴壁分离许旺细胞是一种简便、快速的提取纯化许旺细胞的方法.
