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转抗菌肽基因辣椒蛋白质检测技术研究
以转抗菌肽BD基因辣椒为材料,研究建立转基因食品中外源目的蛋白的检测技术,并建立对其忠实表达状况和安全性进行评价的模式.以柞蚕蛹免疫血淋巴作为标准,对照检测转抗菌肽辣椒目的蛋白表达的忠实性,采用针对转基因食品技术特点而预先设计的技术路线进行分析检测.研究和检测步骤为:目的蛋白经粗提,达到初步纯化.再用两次CM-Sepharose-FF离子交换柱层析进行中度纯化.纯化产物通过测定抗菌活性、电泳及生物自显影、质谱进行鉴定.系统的检测结果表明,以抗菌肽目的基因构建的重组体在导入辣椒后,所表达的外源目的蛋白与对照标准蛋白的理化性质、抗菌活性、分子量一致,说明在该转基因辣椒中抗菌肽目的基因的表达是忠实的,与期望值相符.本研究建立了目的蛋白抗菌肽D的分离纯化及鉴定技术,建立了转基因辣椒外源目的蛋白的鉴定方法.方法简便快捷可行.
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转基因食品安全性检验的核酸检测技术研究
以国际市场上转基因食品的主流产品转基因大豆及玉米和我国生产的转基因辣椒为材料,以PCR方法为基础,研究适用于转基因食品安全性检验的核酸检测技术.针对抗除草剂(孟山都公司)GM-大豆,转Bt-176玉米(Novartis/Ciba-Geigy公司)及转抗菌肽辣椒(华农)产品的插入基因及调控序列设计不同引物进行PCR检测.建立了转基因大豆、玉米、辣椒的鉴别和相关标记基因、目的基因检测的技术,该方法简便快速,检测结果与标准及申报材料相符.