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CPT-Ⅱ基因4号外显子质粒构建与变异分析
背景:肉毒碱棕榈酰转移酶Ⅱ(Carnitine palmitoyltransferase-Ⅱ,CPT-Ⅱ)位于细胞线粒体内膜上,是脂肪酸氧化过程中起关键作用的酶之一.目前关于流感病毒感染与CPT-Ⅱ基因变异尚未见报道.目的:构建CPT-Ⅱ第4号外显子(E4)表达质粒及其核苷酸变异分析.方法:从流感病毒感染2例患者外周血中提取DNA,以PCR法扩增CPT-Ⅱ基因的第4号外显子,将其片段插入pGEM-T载体,以T4 DNA连接酶,构建T-CPT-Ⅱ E4,转化大肠杆菌DH5α细胞,增菌,制备质粒,EcoR I酶切、测序和变异分析.结果与结论:成功构建重组表达质粒pGEM-T-CPT-ⅡE4,经DNA测序,证实质粒中插入CPT-Ⅱ第4号外显子完整序列,全长1 305个核苷酸,编码435个氨基酸;与Genebank源序列对照比较,发现含有两个变异位点:1 618(GTC→ATC)和1 858 (TTT→TCT),对应氨基酸为V368I和F448L.
关键词： 肉毒碱棕榈酰转移酶Ⅱ(CPT-Ⅱ) 外显子4 基因扩增 变异 流感病毒A -
宫颈癌患者中β- 微管蛋白Ⅰ基因外显子4突变与多西紫杉醇同步放疗疗效关系初探
目的 探讨β- 微管蛋白Ⅰ外显子4 在宫颈癌患者中的基因突变与多西紫杉醇同步放疗疗效关系.方法 采用焦磷酸测序法对16 例宫颈癌患者新鲜组织标本和血标本中β- 微管蛋白Ⅰ外显子4进行检测.于静脉滴注25mg/m2 多西紫杉醇1 小时后进行化疗.用临床妇科检查的方法评价多西紫杉醇同步放疗疗效,分析不同基因型与疗效的关系.结果 16 例病人近期疗效均为完全缓解,没有复发,患者仍然生存.2 病例中β- 微管蛋白Ⅰ外显子4 在217Leu 发现纯合子和杂合子的同义突变,但与多西紫杉醇同步放疗疗效无关.结论 由于病例有限,本实验中患者的基因突变与多西紫杉醇没有显示相关性,但仍需搜集更多病例进一步探讨两者之间的关系.
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人巨细胞病毒UL123基因外显子4诱饵质粒的构建与鉴定
目的 构建和鉴定人巨细胞病毒(HCMV)UL123基因外显子4(ie1-exon4)的诱饵质粒,并评价其用于细菌双杂交系统筛选文库的可行性.方法 以重组质粒pTWIN1/ie1为模板扩增ie1-exon4,克隆入pBT质粒,转化E.coli XL1-Blue MRF'Kan,经PCR、限制性酶切和测序鉴定阳性重组子,提取阳性重组质粒,再转化入细菌双杂交系统报告茵株,诱导表达重组融合蛋白,用SDS-PAGE和Western Blot对表达产物进行鉴定,并进一步鉴定重组子自身激活作用.结果 细菌双杂交诱饵质粒pBT/ie1-exon4构建成功,并在报告菌株中表达了重组融合蛋白rIE1-C86-491/λC1,且pBT/ie1-exon4无自身激活作用.结论 成功构建了无自激活作用的诱饵质粒pBT/ie1-exon4,可用于筛选文库.
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子宫内膜癌c-abl基因的突变及临床意义
目的:研究c-abl基因在子宫内膜癌组织的突变情况及其临床意义,探讨其与子宫内膜癌的关系.方法:应用PCR技术及序列分析方法检测和分析正常子宫内膜11例(正常内膜组)、子宫内膜良性病变21例(良性病变组)、子宫内膜不典型增生16例(不典型增生组)、子宫内膜癌62例(子宫内膜癌组)中c-abl基因在外显子3(exon3)、外显子4区(exon4)的突变,及其与子宫内膜癌不同临床病理特征的关系.结果:①c-abl基因在exon3、exon4的突变总体上表现为点突变.子宫内膜癌组及不典型增生组的突变率(77.42％,56.25％)较正常内膜组及良性病变组高(0,14.29％),差异有高度统计学意义(P＜0.01).②子宫内膜癌组织中,突变率与病理类型无关,随肿瘤组织分化程度降低、临床分期增高及淋巴结转移而增高(P＜0.05)；③在子宫内膜癌组织中,c-abl基因在exon3、exon4区的点突变集中在3个位点,它们或单独或共同存在,影响c-abl蛋白的结构和功能.结论:c-abl基因在exon3、exon4区的突变与子宫内膜癌的发生发展有关.其突变率随着子宫内膜癌的分化、临床分期的进展和淋巴结转移而增高,该基因的突变可成为判断子宫内膜癌恶性程度的指标之一.
