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载体介导的人支气管上皮细胞DNA聚合酶β基因的靶向RNA干扰
目的运用载体介导的RNA干扰技术靶向抑制人DNA聚合酶β基因在支气管上皮细胞中的表达,为研究DNA聚合酶β在环境化学污染物所致DNA损伤修复中的功能和机制作准备.方法利用分子克隆技术构建含pU6启动子的人DNA聚合酶β基因RNA干扰特异性绿色荧光蛋白C1载体重组子"pEGFP-C1-U6-dsRNA";以脂质体法将载体重组子转染人支气管上皮细胞,同时以空白细胞和空载体转染细胞作对照;在经G418筛选后,以荧光显微成像技术观察细胞的转染效果,以蛋白印迹法分析转染后细胞中的DNA聚合酶β表达情况.结果在转染重组子的细胞中,DNA聚合酶β的表达明显下调,仅相当于正常细胞的17.3%.结论人支气管上皮细胞DNA聚合酶β基因的靶向抑制成功.
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DNA聚合酶β基因在眼睑基底细胞癌中的表达及意义
目的 探讨DNA聚合酶β基因在眼睑基底细胞癌中的表达及意义.方法 收集30例眼睑基底细胞癌及30例癌旁正常眼睑组织为研究对象,RT-PCR、荧光定量PCR技术检测标本中Polβ聚合酶基因的表达差异,western blot技术检测标本中Polβ聚合酶在蛋白水平的表达差异;对正常眼睑组织及眼睑基底细胞癌组织中Polβ基因的表达进行统计学分析.结果 荧光定量和western blot结果显示,30例正常眼睑组织中仅有5例Pol β基因呈高水平表达,其余25例低水平表达;30例眼睑基底细胞癌标本中,9例早期眼睑基底细胞癌中6例呈高水平表达,3例低水平表达;21例浸润性眼睑基底细胞癌组织中有16例呈高水平表达,5例呈低水平表达.Polβ基因在正常眼睑组织中的表达低于在眼睑基底细胞癌组织中的表达,有显著性差异(P＜0.05).结论 Pol β基因在眼睑基底细胞癌组织中的表达明显高于正常对照,提示Pol β基因以高水平表达的方式参与眼睑基底细胞癌的发生发展过程.在眼睑基底细胞癌发生的早期即可发现Pol β基因的高表达,提示其可以作为癌变的一个早期诊断标准.
