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实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)文献资料
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MS2噬菌体在贝类食源性病毒检测中过程质控应用
目的 研究MS2噬菌体作为过程质控品在贝类食源性病毒检测中的应用.方法 采用双层琼脂培养法制备MS2噬菌体悬液,计算效价;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检验其稳定性;比较3种RNA提取方法的提取效率,确定MS2噬菌体的适添加量范围;分析MS2噬菌体添加对贝类食源性病毒检测的影响.结果 稳定性研究表明-20℃和-80℃28 d MS2噬菌体(悬液的效价浓度为7.13×1011 pfu/mL)时RNA含量无明显变化[t =0.464,P=0.653(-20℃);t=0.602,P=0.561(-80℃)].MS2噬菌体适添加量范围为7.13 ×108 ～7.13×107 pfu/mL.在适添加范围内,试剂盒方法和Trizol裂解结合磁珠纯化方法回收率均＞1％.2种阳性样品均被检出,其Ct值比较接近,MS2噬菌体对贝类食源性病毒检测无影响(t=0.170,P=0.873).结论 MS2噬菌体可作为贝类食源性病毒qRT-PCR检测的过程质控品,是监控假阴性结果的一种简便有效的方法.
