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allele-specific PCR(AS-PCR)文献资料
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百日咳鲍特菌23S rRNA位点变异AS-PCR检测方法建立
目的 根据allele-specific PCR(AS-PCR)原理,建立具有良好敏感性与特异性的百日咳鲍特菌23S rRNA位点变异检测方法.方法 基于百日咳鲍特菌23S rRNA A2047G位点突变与其对红霉素耐药的相关性,设计包含特异变异位点的引物进行两阶段PCR反应,根据电泳有无特异大小目的片段的出现,确定百日咳鲍特菌23S rRNAA2047G位点是否有变异.结果 以基因序列测定法为金标准的评价结果显示,AS-PCR法检测突变型菌株的灵敏度为96 ％(144/150),特异度为100 ％(100/100),kappa=0.95(P＜0.01);检测野生型菌株的灵敏度为100 ％(18/18),特异度为100 ％(100/100),kappa=1(P＜0.01).结论 AS-PCR方法检测百日咳鲍特菌23S rRNA A2047G位点变异具有较高灵敏度和特异度,适用于普通微生物实验室开展百日咳鲍特菌对红霉素耐药性的快速检测.
