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汉坦病毒S基因真核表达载体的构建及表达
目的将编码汉坦病毒76-118株核蛋白的S基因片段克隆到真核表达载体pTARGETTM,构建含汉坦病毒核蛋白S基因的重组真核表达质粒pTARGET-hans,并在体外进行瞬间表达.方法采用PCR产物直接克隆方法,将核蛋白S基因插入到真核表达载体pTARGETM中;酶切鉴定;用电穿孔法将重组质粒转染入Vero-E6细胞;用间接免疫荧光法检测其表达产物.结果酶切鉴定证实S基因已被正确地插入pTARGETTM中;在部分转染重组质粒的Vero-E6细胞胞质内观察到中等强度的特异性荧光.结论重组的真核表达载体pTARGET-hans已被成功地构建并可在体外表达,为下一步基因免疫打下基础.
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肾综合征出血热病毒核酸的免疫研究
目的编码NP的S基因进行病毒核酸的免疫研究.方法进行实验动物的DNA免疫,细胞因子的测定,淋巴细胞增殖反应测定,免疫鼠血清的抗核蛋白NP抗体的测定.结果蛋白在Vero-E6细胞中的瞬时表达.免疫鼠细胞因子:接种pcDNA3.1+S的鼠IL-4的产生和IFN-γ的产生均较对照组要高.细胞增殖反应:阳性对照刀豆蛋白A(ConA)刺激组的增殖指数为2.1,对照空载体增殖指数较低为0.797,而实验组pcDNA3.1+S接种组和pcDNA3.1+S(ISS)接种组的增殖指数分别为1.43和1.67.免疫鼠血清特异性抗体的检测:接种pcDNA3.1+S(ISS)免疫鼠的血清抗体水平较接种pcDNA3.1+S免疫鼠的血清抗体水平升高明显.而空载体pcDNA3.1+接种组的小鼠血清抗体水平低.结论肾综合征出血热(HFRS)病毒编码NP的S基因作为病原体的抗原基因进行的核酸免疫,可以起到免疫保护作用.
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插入CpG序列的汉坦病毒S基因真核表达载体的构建及表达
肾综合征出血热(HFRS)是一类由汉坦病毒引起的以发热、出血和急性肾功能损伤为特征的急性病毒性传染病.
