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无机砷对肝细胞转录因子Nrf2及其调控蛋白表达影响
目的 探讨不同时间和不同浓度亚砷酸钠( NaAsO2)暴露对Chang肝细胞株NF-E2相关因子2(Nrf2)、及其调控的下游抗氧化酶NAD(P)H:醌氧化还原酶1( NQO1)和血红素单加氧酶-1(HO-1)蛋白表达的影响.方法 25 μmol/L NaAsO2作用Chang肝细胞2、4、6、12和24h;或不同浓度的NaAsO2(10、25和50 μmol/L)作用Chang 肝细胞6h,免疫印迹法(western blot)检测细胞内Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达情况.结果 25 μmol/L的NaAsO2可以明显诱导Chang肝细胞Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达(P ＜0.01)；Nrf2蛋白2h开始明显诱导,4h表达水平高,此后随暴露时间的延长虽然表达有所下降,但持续至24 h仍明显高于对照组；NQO1的蛋白表达水平也从4h开始增加并持续至24 h;HO-1的蛋白表达则从6h开始明显诱导,且随暴露时间的继续延长表达持续上升,具有明显的时间-效应关系；10、25和50 μmol/L NaAsO2染毒6h,Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达均随染毒剂量的增加而大量诱导,具有明显的剂量-效应关系(P＜0.01).结论 NaAsO2暴露能够诱导Chang肝细胞Nrf2、NQO1和HO-1蛋白表达增强,且具有一定的剂量-效应关系.
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珠子参总皂苷对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用及机制研究
目的:研究珠子参总皂苷预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤(Myocardium ischemia/Reperfusion injury,MI/RI)的保护作用及可能的作用机制.方法:实验大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注模型组、珠子参总皂苷100和200 mg/kg组.治疗组各组大鼠分别给予相应的药物,给药7d后,行冠状动脉结扎术,结扎30 min后,再灌注24 h.记录再灌注后30 min内心律失常发生情况,24 h后进行血流动力学测定,然后取血进行乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和过氧化氢酶(CAT)含量分析;心脏经TTC染色和HE染色,计算心肌梗死面积和心肌组织形态学观察.实时定量PCR检测SOD/GPX/CAT反应系统SOD1～SOD3、GPX1和CAT基因表达,Western blot检测细胞质和细胞核Nrf2蛋白表达.结果:珠子参总皂苷(100、200 mg/kg)可显著降低心律失常发生率(P＜0.01),能明显改善心功能,降低血液中CK、LDH含量和MDA水平,增加SOD、GSH-Px、CAT酶的活性;减轻ROS所致心肌氧化应激损伤,降低心肌梗死面积(P＜0.05,P＜0.01)和改善心脏组织形态学;上调SOD/GPX/CAT反应系统基因表达水平和促进Nrf2核移位,增加心肌细胞核内Nrf2的表达水平(P＜0.01).结论:珠子参总皂苷对MI/RI具有较好的保护作用,激活Nrf2抗氧化途径和抗脂质过氧化可能是其作用机制之一.
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促进转录因子Nrf2表达的中药文献分析——体内抗氧化药物筛选
目的:探讨刺激转录因子Nrf2信号通路,调节肌体抗氧化、促还原的药食中药,确定药名.方法:采用中国期刊全文专题数据库(CNKI)等以关键词“转录因子Nrf2”“中药筛选”“文献分析”进行检索,按照纳入和排除标准筛选2004-2014年公开发表的文献,用Excel2007创建文献题录库,存储、提取数据;建立文献计量统计分析与多指标评价相结合的方法:抗氧化,影响Ⅱ相解毒酶与蛋白激酶(GST、UGT、NQO1、GSH、ERK、JNK)活性,刺激Nrf2诱导Ⅱ相解毒酶表达,比较中药刺激Nrf2的强弱.结果:纳入符合要求的文献共计57篇,包括中药28种,化合物40种,疾病16种.结论:筛选出22种与指标评价相符的药物,其中刺激Nrf2诱导Ⅱ相解毒酶表达强的中药为姜黄、洋甘菊、红车轴草.
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珠子参总皂苷通过促进Nrf2转位拮抗新生大鼠心肌细胞氧化应激损伤
目的 观察珠子参总皂苷H2O2所致氧化应激损伤保护效应并探讨其机制.方法 Wistar乳鼠心肌细胞原代培养,用H2 O2建立氧化应激损伤模型,然后用珠子参总皂苷(100、200 μg/ml)孵育24h后,观察细胞搏动频率,MTT法检测珠子参总皂苷对细胞活力的影响,流式细胞仪和Hoechst33258染色检测珠子参总皂苷对氧化应激诱导细胞凋亡及胞内ROS含量的影响,比色法测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)含量,同时检测培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量,实时定量PCR技术检测珠子参总皂苷对SOD/GPX/CAT反应系统SOD1、SOD2、SOD3、CAT和GPX1基因表达的影响,Western blot检测珠子参总皂苷对细胞质和细胞核Nrf2蛋白表达的影响.结果 H2O2明显影响细胞活力和诱导凋亡(IC50为500 μmol/L),珠子参总皂苷(100、200 μg/ml)处理能显著增加心肌细胞搏动频率和存活率(P＜0.01),抑制心肌细胞凋亡和改善细胞形态,降低细胞内ROS含量(P＜0.01)；减轻H2O2所致乳鼠心肌细胞培养液中LDH、CK释放量,同时能够升高SOD、CAT和GSH-Px活性,降低MDA含量(P ＜0.05,P＜0.01)；上调SOD/GPX/CAT反应系统基因表达水平和促进Nrf2核移位,增加心肌细胞核内Nrf2的表达水平(P＜0.05,P＜0.01).结论 珠子参总皂苷抑制心肌细胞氧化应激损伤,与Nrf2抗氧化途径的激活和清除ROS有关.
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珠子参皂苷对四氯化碳致大鼠肝纤维化的保护作用
目的:观察珠子参皂苷对四氯化碳(CCl4)致大鼠肝纤维化的保护作用及可能机制.方法:腹腔注射2ml/kg 50％CCl4橄榄油溶液制备大鼠肝纤维化模型,首次注射后分别灌胃给予珠子参皂苷(100和200mg/kg)和秋水仙碱(100 mg/kg),正常组和模型组给予等体积的0.5％羧甲基纤维素钠溶液,每天1次,共8周.8周后取血清,检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;肝脏经组织匀浆和HE染色后,分析肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量和形态学,计算肝纤维化分级、胶原纤维面积比、网状纤维面积比;实时定量PCR检测肝组织中SOD1、SOD2、SOD3、CAT和GPX1基因表达,Western blot检测细胞质和细胞核中Nrf2蛋白表达.结果:珠子参皂苷100和200mg/kg和秋水仙碱(100 mg/kg)能明显改善肝功能,降低血液中ALT、AST、ALP和MDA水平,增加SOD、GSH-Px、CAT活性和TP、ALB水平和A/G比值,降低肝纤维化分级、胶原纤维面积比、网状纤维面积比和Hyp含量,改善肝脏组织形态学;上调SOD1、SOD2、SOD3、CAT和GPX1基因表达和促进Nrf2核移位,增加肝细胞核内Nrf2的蛋白表达水平,特别是珠子参皂苷200mg/kg剂量组尤其显著.结论:珠子参皂苷对CCl4致大鼠肝纤维化具有较好的保护作用,促进Nrf2核移位和增强内源性抗氧化系统功能可能是其作用机制之一.
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鸦胆子苦醇抑制黑色素瘤生长和增殖的作用机理研究
目的 研究中药鸦胆子苦醇对黑色素瘤细胞增殖和凋亡的作用机制.方法 采用细胞活力测定(MTS)不同浓度的鸦胆子苦醇对黑色素瘤A375细胞生长抑制率;应用PI单染及Annexin-V-FITC双染法流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率的变化;以DCFA-DA荧光探针标记细胞,分析活性氧簇(ROS)的产生;利用Western Blot检测Nrf2及Akt通路蛋白表达的影响.结果 鸦胆子苦醇对黑色素瘤细胞的生长抑制呈剂量依赖性;鸦胆子苦醇处理A375细胞后,细胞周期阻滞在G1期,S期减少.且鸦胆子苦醇诱导细胞细胞凋亡发生;免疫沉淀检测结果表明鸦胆子苦醇处理移植Nrf2蛋白的表达,使磷酸化Akt表达减少.结论 鸦胆子苦醇可抑制细胞增殖,并诱导ROS的生成及细胞凋亡发生.Akt途径的抑制可能是鸦胆子苦醇对A375细胞生长抑制及凋亡诱导的作用机制之一.因此,鸦胆子苦醇可能是潜在的抗黑色素瘤的药物.
