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呼吸机导管内细菌生物被膜抗吞噬作用
目的 探讨侵入性导管内细菌生物被膜抗吞噬作用.方法 于2010年7月-2011年12月收集新生儿ICU病房危重新生儿病例呼吸机导管标本32份,对导管内壁细菌分离鉴定,选择生物膜模式菌株模拟导管中液体流动状态重建细菌生物被膜,观察细菌生物被膜形态结构及吞噬细胞与细菌生物被膜的相互作用,分析导管细菌生物被膜形成与导管伴生感染的关系.结果 32例导管标本经细菌分离培养和ATB生化鉴定,显示鲍曼不动杆菌14株,铜绿假单胞菌9株,葡萄球菌6株,真菌3株；14例鉴定的鲍曼不动杆菌标本中有8株产生生物被膜菌株；患者侵入性导管容易被细菌粘附形成生物被膜,扫描电镜可用于观察细菌生物被膜形成情况,生物被膜具有明显抗吞噬作用.结论 生物被膜抗吞噬作用是感染难治的重要因素.
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血清型2型猪链球菌烯醇化酶参与猪链球菌抗吞噬作用
目的 制备高纯度的猪链球菌烯醇化酶(SsEno)重组蛋白并通过抗体封闭实验评价SsEno对猪链球菌抗吞噬能力的影响,鉴定其与人纤维蛋白原(hFg)结合的活性.方法 构建hisSsEno重组表达质粒,将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE分析蛋白表达情况,镍柱亲和纯化目的蛋白并用Western blot法进行验证.用hisSsEno免疫兔制备其高滴度的抗血清并通过人全血杀伤模型评价Eno对猪链球菌抗吞噬能力的影响.采用ELISA和Far-Western blot法鉴定hisSsEno与hFg结合活性.结果 成功构建了His标签蛋白原核表达质粒并获得了高纯度的hisSsEno重组表达蛋白.SsEno免疫的抗血清能显著降低强致病的猪链球菌05ZYH33在人全血中的存活能力.hisSsEno能特异地与hFg结合.结论 获得了hisSsEno重组表达蛋白,通过抗体阻封和全血杀伤模型发现SsEno是猪链球菌潜在的抗吞噬因子,且hisSsEno能特异性结合hFg.
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2型猪链球菌双组分调控系统SalK/SalR抗吞噬机制的初步研究
目的 确定双组分调控系统SalK/SalR在2型猪链球菌抵抗THP-1单核细胞来源的巨噬细胞(THP-MΦ)吞噬中的作用.方法 透射电子显微镜观察野生株05ZYH33和突变株△salKR荚膜的变化,革兰氏染色及免疫荧光方法观察猪链球菌与THP-MΦ细胞的相互作用,通过THP-MΦ细胞吞噬模型评价猪链球菌的抗吞噬能力.结果 透射电子显微镜观察发现突变株△salKR荚膜消失,革兰氏染色结果和免疫荧光标记实验显示salKR缺失导致更多的猪链球菌被THP-MΦ细胞吞噬,THP-MΦ细胞吞噬模型进一步证实突变株△salKR比野生株更容易被THP-1细胞吞噬.结论 双组分调控系统SalK/SalR通过调控荚膜的形成来抵抗THP-MΦ细胞的吞噬.
