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NF-κB p65基因沉默条件下HT29细胞中Survivin表达活性的研究
目的:以特异性siRNA转染结肠癌细胞HT29,沉默NF-κB p65基因的表达,研究肿瘤细胞中NF-κB p65调节Survivin基因的表达.方法:以噻唑蓝(MTT)法观察对细胞增殖活性的影响,明确佳的作用浓度.通过Western Blot检测结肠癌细胞内NF-κB p65及Survivin蛋白表达水平的变化.将设计合成好的特异性针对NF-κB p65基因的片段,体外转染结肠癌细胞株HT29,Western Blot检测NF-κB p65基因沉默效应,进而观察时结肠癌细胞Survivin蛋白表达水平的影响,明确NF-κB p65是否有Sunrivin表达的调节作用.结果:siRNA干扰后细胞内NF-κB p65蛋白表达水平降低,较对照细胞组差异有统计学意义(P<0.01).同时NF-κB p65基因沉默后,取消了先前缺氧条件下细胞内Survivin的表达增高,与对照细胞组相比无统计学意义差异(P>0.05).结论:采用特异性siRNA片段对结肠癌进行靶向NF-κB p65基因沉默,能有效降低Survivin基因的表达,抑制Survivin能通过多种信号转导通路参与肿瘤的发生发展过程.
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姜黄素下调结直肠癌细胞Notch1信号通路研究
目的 检测Notch1信号通路中Notch intracellular domain蛋白(NICD1蛋白)在大肠腺癌组织中表达的情况;探讨姜黄素对人结肠癌细胞SW480及HT29细胞中Notch1信号通路的影响.方法 二步法免疫组化检测40例结直肠癌、31例癌旁肠组织石蜡切片中Notch1 intracellular domain蛋白(NICD1)的表达情况,通过对比人结肠直肠癌与癌旁正常肠黏膜细胞中蛋白阳性表达率判断NICD1蛋白与人结直肠癌的关系;不同浓度姜黄素(0、7.5、15、30、60 μmol/L)分别处理结肠腺癌细胞SW480和HT29细胞24 h和48 h后,Western blot法检测细胞内NICD1、Notch1及HES-1蛋白的表达情况.结果 NICD1在人结直肠癌组织中均表达,阳性率100％,癌旁肠组织中部分表达,阳性率为90.3％,但癌组织表达强度明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot结果示姜黄素能下调人结肠腺癌细胞SW480及HT29细胞中NICD1、Notch1及HES-1蛋白的表达,有时间和剂量依赖.结论 Notch1信号通路中NICD1蛋白在结直肠癌组织中的过度表达可能与肿瘤的发生发展相关,其阳性表达的部位可能与癌组织的病理分期有关;姜黄素可能通过调控Notch1信号通路抑制结直肠癌细胞增殖.
