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BamH Ⅰ+Xho Ⅰ双酶切质粒电泳弥散原因初探
目的 探讨TaKaRa公司(中国大连)快速限制酶BamH Ⅰ+Xho Ⅰ 37℃双酶切质粒pET-28a、pET-28a-SDHA产生弥散的原因. 方法 比较4种条件下酶切对弥散的影响:①BamH Ⅰ+Xho Ⅰ 37℃双酶切Elution Buffer(EB)洗脱或水洗脱的质粒;②NdeⅠ+Xho Ⅰ 37℃双酶切EB洗脱或水洗脱的质粒;③先BamH Ⅰ 30℃酶切,再XhoⅠ 37℃酶切;④BamH Ⅰ分别于30℃、37℃单酶切. 结果①amH Ⅰ+Xho Ⅰ 37℃双酶切EB或水洗脱的质粒均产生严重弥散;②NdeⅠ+Xho Ⅰ 37℃双酶切EB洗脱或水洗脱的质粒无弥散;③BamH Ⅰ 30℃酶切+Xho Ⅰ 37℃酶切,无弥散;④BamH Ⅰ 30℃单酶切无弥散,37℃单酶切严重弥散. 结论BamH Ⅰ+XhoⅠ 37℃酶切质粒电泳弥散是BamH Ⅰ在此温度下的星活性所致.
