甲状腺激素释放相关水解酶基因在H22肝癌小鼠早期不同证候中的表达特征
摘要： 目的：研究甲状腺激素释放相关主要水解酶基因在H22肝癌小鼠早期不同证候中的表达特征。方法采用标准化诊法技术筛选出早期邪毒证、气虚证H22肿瘤小鼠，先采用Affeymetrix基因芯片技术，初步获得甲状腺球蛋白(Tg)，即甲状腺激素前体蛋白，及其相关的水解酶基因表达特征，并筛选主要差异表达基因；进而重复实验，RT-PCR检测主要差异表达基因的变化，同时ELISA检测血清甲状腺激素T3和T4水平。结果①初次实验芯片结果，Tg及其释放相关重要的水解酶：组织蛋白酶B(Ctsb)、组织蛋白酶D(Ctsd)、组织蛋白酶l(Ctsl)、天冬氨酸肽酶(Napsa)、三肽酶I (Tpp1)在肝癌小鼠早期邪毒证、气虚证呈下调趋势[Tg(邪毒0.77、气虚0.84)、Ctsb(邪毒0.83、气虚0.91)、Ctsd(邪毒0.79、气虚0.95)、Ctsl(邪毒0.95、气虚0.65)、Napsa(邪毒0.78、1.05)、Tpp1(邪毒0.75、0.94)]，以邪毒证下降尤甚。②酶联免疫吸附试验(ELISA)表明，在邪毒证[T3为(1.519±0.162)ng/ml、T4为(2.194±0.305)μg/dl]和气虚证[T4为(4.366±0.727)μg/dl]均出现下调，且邪毒证尤甚(P＜0.01)，与两批次Tg转录水平的变化相一致；③对Ctsb等基因的RT-PCR检测结果表明，Tg(邪毒0.22、气虚0.38)、Ctsb(邪毒0.31、气虚0.55)、Ctsd(邪毒0.36、气虚0.78)、Napsa(邪毒0.24、气虚0.59)基本一致，Ctsl(邪毒1.24、气虚2.11)和Tpp1(邪毒2.85、气虚0.85)虽趋势相同，但在气虚证表达量大于同期邪毒证上则始终一致。结论综合不同批次实验结果，H22肝癌小鼠早期甲状腺功能受到抑制，且邪毒证抑制程度更重。
