[摘要]目的探讨异丙盼对百草枯( paraquat, PQ)中毒所致肺损伤及核因子一KB ( nuclear factor kappaB,NF - KB)在肺组织中表达的影响O方法128只雄性Wistar大鼠分为3组,对照组(8只),染毒组( 60只),异丙盼 组(60只) 0 50mglkg PQ一次性灌胃建立染毒大鼠模型,对照组Imi/kg生理盐水一次性灌胃。异丙盼组染毒后给予1%异丙盼注射液IOmglkg腹腔注射,2次/d,连用4d;染毒组染毒后予等体积的生理盐水腹腔注射,2次/d,连用4d。观察大鼠l、3、7、14、28d(对照组观察7d)的肺组织病理改变,并用链霉亲和素生物素标记法(labelledst陀ptav凶n biotin method, LSAB)检测NF-KB和肿瘤坏死因子-α在3组大鼠各时间段肺组织中的表达变化。结 果染毒组大鼠早期表现为肺水肿、出血及炎细胞浸润,14d后出现肺泡间隔纤维性增厚;异丙盼组上述早期表现明显减轻,但14d后与染毒组比较无明显改善。染毒组大鼠肺组织中NF-KB和肿瘤坏死因子-α于染毒后1、3d时有明显表达,7d后表达明显减弱;异丙盼组NF- KB和肿瘤坏死因子-α在不同时表达与染毒组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论异丙盼能明显减轻PQ中毒大鼠急性期的肺组织损伤,但对NF-KB表达无明显影响。

  [关键词]二异丙盼;百草枯;NF - KB;大鼠 doi: 10. 3969/j. issn. 1007-3205.2012.01.∞5

  [中图分类号]盯95.3[文献标志码1 A[文章编号1 1∞7-3205(2011 )01,,(则12-05

  EFFECT OF PROPOFOL ON LUNG INJURY INDUCED BY PARAQUAT AND THE EXPRESSION OF NUCLEAR FACTOR kappaB n叫LUNG TISSUE OF RATS

  HU lunli1,TIAN Yingping1,YUAN Shuyun2,SHI Hanwen1,TONG Fei1

  (1. Department of Emergency, the Second Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050α刃,China;2. Department of Emergency, the Hospital of Lingshou County, Hebei Province, Lingshou 050500, China)

  ABSTRACT: Objective To investigate the influence of propofol on paraquat ( PQ) - induced lung injury and the expression of nuclear factor kappaB in lung tissue of rats. Methods A total of 128 male Wistar rats were randomly divided into 3 groups, the control group ( n = 8 ),the intoxication group (n = 60),the propofol group (n = 60) . Rats in propofol group received PQ (50mglkg body weight) in a single oral and propofol at a dose of 10mglkg body weight after PQ, twice daily, intraperitoneally; Intoxication group was treated identically to the propofol group except for the substitution of 0.9% saline for propofol; Control group received 1 mUkg body weight of saline, orally.

  百草枯( paraquat, PQ)中毒在临床上十分常见,由于缺乏有效治疗,其病死率颇高.治疗形势不容乐观。PQ中毒肺损伤是主要死因。目前多数学者I认为大量自由基的形成是造成PQ中毒肺损伤的主要机制,核因子- KB ( nuclear factor kappaB, NF -KB)参与了急性肺损伤的发病过程一2 - 3~。异丙酣是 一种临床常用的镇静剂及麻醉诱导剂,具有清除自由基和抗氧化4斗的作用c本研究通过给大鼠以PQ灌胃建立PQ中毒大鼠肺损伤模型,观察异丙酣 对PQ中毒肺病理改变及NF - KB在肺组织中表达的影响。报告如下。1材料与方法

  1.1主要药品及试剂:20% PQ搭液由英国捷利康 公司生产;1%异丙酣注射液由西安力邦制药有限公司生产;鼠单抗NF - KB p65抗体SC -8008、SP免疫组织化学染色试剂盒(SP - 9002)及浓缩型DAB试剂盒(ZLI -9032)均购自北京中杉生物技术有限公司;兔多抗肿瘤坏死因子-α( tumor necrosis factoralpha, TNF -α)抗体(BA0131)购自武汉博士德生 物工程有限公司。

  1.2动物分组及模型建立:健康成年雄性Wistar大鼠128只,体质量280 - 32饨,由河北医科大学动物中心提供,分为3组,①异丙酣组60只,用PQ50mglkg( 20% PQ溶液用生理盐水稀释至5%)一 次性灌胃染毒,染毒后Ih开始给予1%异丙酣注射液IOmglkg腹腔注射,2次/d,连用4d;②染毒组60只,与异丙盼组同量灌胃染毒,自染毒后1h开始给予与异丙酣溶液等体积的生理盐水腹腔注射,2次/d,连用4d;③对照组8只,1mUkg生理盐水一次性 灌胃O

  1.3动物处理及标本采集:放弃死亡及标本采集 失败大鼠,染毒组、异丙酣组分别不同处理后,于染毒后l、3、7、14、28d各取8只大鼠,心脏取血处死,取左肺踊面相同部分行病理观察,对照组8只大鼠于7d时以上述同样方法处死及留取标本。

  1.4苏木素-伊红( hematoxylin - eosin, HE)染色 方法:载玻片泡酸清洁3-氨丙基-3 -2氧基甲硅皖(3 - aminoprogyl - triethoxysilane, APES)防脱片处理,新鲜肺组织标本反时用4%甲醒固定,固定时间大于24h,继丽常规脱水、透明、包埋,制备蜡块,用切片机进行5?m厚连续切片,然后放人水浴箱中展片.待组织充分舒展后用载玻片捞取组织。捞片置烤箱60"C 40mino HE染色进行光镜组织形态学观察。

  1.5免疫组织化学( immunohistochemist巧,IH)实验 步骤:采用链霉亲和素生物素标记法( lobelledstr叩tavidin biotin method, LSAB)法进行染色,观察 NF - KB p65、TNF -α在大鼠肺组织中的表达和分布 情况。具体步骤如下,①载玻片泡酸清洁,APES防脱片处理,5?m厚连续切片,捞片置烤箱60"C40mino②石蜡切片脱蜡至水。③新鲜配置3%双 氧水甲醇榕液室温孵育30min,以消除内源性过氧化物酶的活性。蒸馆水冲洗2min x 3次,PBS浸泡5min x3次已④水浴抗原修复,切片放人盛有拘橡 酸盐缓冲液(pH值6.0)的容器中,温度到达92"C-98"C起计时30min,室温冷却30min左右,蒸馆水冲 洗2min x3次,PBS洗5min x 3次。⑤5% -10%正常山羊血清( PBS稀择)封闭,37"C孵育15mino⑥倾去血清,勿洗,滴加稀释的一抗( PBS稀释,NF-KB p65抗体以1: 100稀释,TNFa抗体以1:50稀释, 阴性对照以PBS代替一抗),4"C过夜( > 12h)。PBS冲洗5min x 3次。⑥滴加生物素标记二抗工作 液,37"C孵育15min, PBS冲洗5min x 3次。⑦滴加第二代辣根酶标记链霉卵白素工作液,37"C孵育15min,PBS冲洗5min x 3次。⑧DAB显色剂显色 3min左右,自来水充分冲洗终止显色,苏木素复染, 分色,脱水,二甲苯透明,树胶封片。

  1.6结果判定:免疫组织化学方法检测NF - KB P65和TNF-α表达的结果判定以胞膜/胞浆/胞核出 现棕黄色着色颗粒为阳性标记,计算5个高倍视野中阳性细胞占细胞总数的百分比。

  1.7统计学方法:应用SPSS11. 0软件包统计,计 量资料以土&plusmn;s表示,组间比较采用单因素方差分析及q检验。P <0.05为差异有统计学意义。

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