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      延胡索为罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang的干燥块茎,具有活血、利气、止痛功效,临床用于治疗胸胁、脘腹疼痛、经闭痛经、产后瘀阻、跌扑肿痛等症[1],主产于浙江。延胡索中主要有效成分为生物碱,生物碱在药材中多数以结合态的生物碱盐存在,少数碱性极弱的以游离态形式存在。延胡索的药理作用表现为镇痛、催眠、降低冠脉阻力及增加血流量等,另外亦对心血管系统有较好的药理活性。延胡索多炮制后入药,主要炮制方法为醋煮、醋炙和酒炙。本试验采用水超声提取法和甲醇加热回流提取法分别提取总生物碱盐和总生物碱,通过高效液相色谱法比较了不同炮制方法对延胡索中延胡索乙素、原阿片碱和去氢紫堇碱含量的影响,为优化延胡索炮制工艺和阐明炮制机理奠定基础。

  1  仪器与试药

    烘箱DHG78-1(湖北省黄石市医疗器械厂);日本岛津HPLC系统(SCL-10AVP HPLC Pump;SPD-ML0AVP二级管阵列检测器);自动进样系统;超声波清洗器AS20500AT(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)。甲醇、乙腈为色谱纯(天津市协和昊鹏色谱科技有限公司);其余试剂均为分析纯;水为超纯水。延胡索乙素(批号0726-200409,中国药品生物制品检定所);去氢紫堇碱(批号043-27611,日本和光纯药工业株式会社);原阿片碱(批号0853-200201,中国药品生物制品检定所)。

    鲜延胡索药材产自浙江东阳;市售延胡索购于天津中新药业集团股份有限公司药材分公司,产自浙江。经本校中药鉴定教研室马琳教授鉴定为罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang的块茎。

  2  方法与结果

  2.1  样品的制备

    醋煮延胡索:取延胡索适量,加入20%的醋,加适量水没过药面,浸润4 h,煮干[2]。

    醋炙延胡索:取延胡索适量,加入20%的醋,加适量水没过药面,浸润4 h,文火炒干[3]。

    酒炙延胡索:取延胡索适量,加入10%的酒,加适量水没过药面,浸润4 h,文火炒干。

    鲜延胡索:将新鲜的延胡索经过晾晒后(含水量约为20%),除去泥土,洗净,按照上述各炮制方法进行炮制。

    水煮延胡索:将新鲜的延胡索经过晾晒后(含水量约为20%),加水煮至内无白心,取出,干燥。按照上述各炮制方法进行炮制。

    市售延胡索:直接按照各炮制方法进行炮制。

  2.2  延胡索乙素、去氢紫堇碱和原阿片碱的含量测定

  2.2.1  色谱条件与系统性试验

  色谱柱为Agilent TC-C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm),美国安杰伦公司;流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(三乙胺调pH 5.3)=28∶72,流速为1 mL/min,柱温为35 ℃,检测波长为280 nm。在此条件下,理论塔板数按延胡索乙素峰、去氢紫堇碱峰和原阿片碱峰计算均不低于3 000。空白溶剂色谱图中在与延胡索乙素、去氢紫堇碱、原阿片碱色谱峰相应位置上无色谱峰,说明此系统条件无干扰。色谱图见图1。

  2.2.2  对照品溶液的制备

  精称去氢紫堇碱对照品6.63 mg、延胡索乙素对照品2.15 mg、原阿片碱对照品1.776 mg,分别置10 mL容量瓶中,加甲醇至刻度。再吸取去氢紫堇碱、延胡索乙素、原阿片碱对照品溶液5、1.7、2 mL于同一10 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,配制去氢紫堇碱、延胡索乙素、原阿片碱浓度为0.331 5 mg/mL、0.036 55 mg/mL、0.035 52 mg/mL的混合对照品溶液。

  2.2.3  供试品溶液的制备

  ①水超声提取法:精称各样品粉末0.5 g,加水25 mL,称重,超声提取30 min后,再称重补足减失重量,过滤,共提取2次,合并滤液,定容到100 mL。过0.45 μm滤膜,取续滤液,即得。②甲醇回流提取法:参考文献[1],精确称取各样品粉末0.5 g,精密加入浓氨试液-甲醇(1∶20)混合溶液50 mL,称定重量,冷浸1 h后加热回流1 h,放冷,再称定重量,用浓氨试液-甲醇(1∶20)混合溶液补足减失重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液25 mL,蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至5 mL容量瓶中并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液。
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