肝损伤是由各种原因引起的肝功能异常，是肝功能衰竭的基础，严重或持续的肝损伤终导致肝功能衰竭。中药治疗肝损伤药物副作用小，价格较低廉，越来越受到研究人员的重视。本实验所用的金匮护肝汤是由乌梅、黄连、黄芪、红参、甘草5种中药组成，是老中医多年用于治疗肝炎的复方制剂，疗效确切。为研究此方药的作用机制，本实验用四氯化碳(CC1 )形成小鼠急性肝损伤模型，探讨金匮护肝汤对急性肝损伤的保护作用。

　　1 材料与方法

　　1．1 实验动物 健康昆明雄性小鼠48只，体重18～22 g。购于安徽医科大学动物实验中心，动物生产许可证号为：SCXK(皖)2011)02。

　　1．2 药品与试剂 CC1 ，上海申翔化学试剂有限公司，批号20090510；联苯双酯滴丸(浙江万邦药业有限公司，批号20110421；丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒、天冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒均购买于南京建成生物工程研究所，批号分别为20110426、20110419、201 10428、201 10420、201 10425。

　　1．3 主要仪器DG3022酶联免疫检测仪(中国人民解放军第四军医大学、华东电子管厂联合研制)；4239R高速低温离心机(意大利ALC公司)；DK一8A电热恒温水浴箱(上海医用恒温设备厂)；MilliQ Biocd 超纯水仪(美国MiHipore公司)；FC204型电子分析天平(上海第二天平仪器厂)；玻璃匀浆器。

　　1．4 方法

　　1．4．1 金匮护肝汤给药量金匮护肝汤根据动物等效剂量的换算，小鼠给药量约是成人的9倍，本次实验小鼠的低剂量给生药量为6．17 g·kg～ -d一，中剂量给生药量为12．34g·kg～ ·d (临床等效量)，高剂量给生药量为24．38 g·kg～ ·d～。

　　1．4．2 药物制备乌梅60 g，黄连、黄芪、红参各10 g，甘草6 g，研碎，加水576 ml，水沸后计时40 rain，后用纱布过滤，滤渣中重新加水384 ml，煎煮，水沸后计时30 min，过滤弃渣，合并2次滤液浓缩至38．4 m1，即每毫升水煎剂含生药2．50 g，放置4℃冰箱冷藏备用。

　　1．4．3 动物分组与处理将48只雄性小鼠随机分成正常对照组、模型组、阳性对照(联苯双酯)组、金匮补肝汤低、中、高剂量组，每组8只。正常对照组和模型组灌胃给予0．1 ml／／10 g的生理盐水，阳性对照组给予15 mg／kg的联苯双酯0．1 ml／10 g，金匮护肝汤低、中、高剂量组分别给予不同浓度的药物0．1 mV10 g。每天灌胃1次，连续7 d。末次给药2 h后，腹腔注射0．2％ CC1 (v／v)油溶液0．1 ml／，10 g。禁食不禁水，16 h后采血，处死小鼠取肝脏，进行指标测定。

　　1．4．4 血清生化指标的检测小鼠摘眼球取血，待血液凝固，4 000 r／rain 4 oC低温离心10 rain取上清液，一2O℃冷冻保存。按照试剂盒操作说明，用赖氏法测定血清ALT和AST的含量。

　　1．4．5 肝脏生化指标的检测将肝脏用4℃的生理盐冲洗，去除血污。取部分肝脏剪碎后，加入9倍生理盐水在冰浴中放入玻璃匀浆器，手动研磨制成10％(m／v)的肝组织匀浆，4 000 r／min离心10 rain取上清液，一20 oc冷冻保存。按照试剂盒操作说明，分别采用黄嘌呤氧化法和硫代巴比妥酸(TBA)法，检测肝组织匀浆中MDA、SOD活性的变化。

　　1．5 统计学方法采用方差分析和q检验。

　　2 结果

　　2．1 金匮护肝汤对CC1 引起急性肝损伤小鼠血清中ALT、AST的影响 结果显示，模型组血清中ALT、AST水平均明显高于正常对照组(P<0．01)，表明造模成功。阳性对照组血清中ALT、AST水平均明显低于模型组(P<0．01)，金匮护肝汤中、高剂量给药组ALT、AST水平均明显低于模型组(P<0．01)(见表1)。

　　2．2 金匮护肝汤对CC1 引起急性肝损伤小鼠肝组织匀浆中MDA、SOD的影响 结果显示，模型组与正常对照组比较，MDA水平显着升高，SOD水平显着降低(P<0．01)，表明造模成功。阳性对照组与模型组比较，MDA含量显着减低，SOD含量显着升高(P<0．O1)。金匮护肝汤中、高剂量给药组MDA含量均低于模型组，SOD含量均高于模型组(P<0．05～P<0．01)。

　　3 讨论 CC1 是一种常用的诱发急性肝损伤模型的化学物质，其造模具有很强的可重复性，在研究肝损伤模型中经常使用。CC1 对肝脏有比较强的毒性作用，与生成自由基和脂质过氧化反应有关。CC1进入体内后，经过细胞色素P450的代谢激活，产生大量活性氧化合物和自由基，引起氧化应激作用，使细胞膜发生了脂质过氧化并且与蛋白质等大分子共价结合，导致细胞膜结构受到破坏，增加细胞膜的通透性，终导致肝细胞内酶的大量渗出，肝细胞死亡。本实验中我们测定了小鼠血清中ALT、AST以及肝组织匀浆中MDA和SOD的含量。ALT、AST存在于细胞中，尤其是肝细胞中大量存在。在肝细胞坏死的情况下，肝细胞中ALT、AST被释放出来，进入血液循环，其浓度与肝损伤程度成正比。因此，在某些程度上ALT和AST的浓度水平反映了肝细胞受损的程度。自由基可以引起脂质过氧化反应，在肝组织的新陈代谢过程中起着重要的作用，肝组织脂质过氧化的程度越高，肝损伤的程度就越严重。MDA是脂质过氧化的终产物，可破坏细胞膜结构，导致细胞肿胀、变性、坏死和凋亡，它含量的高低可反应氧化损伤的程度。SOD是机体内存在的超氧自由基清除因子，可以修复自由基对肝细胞造成的损害。因此测定MDA、SOD的量常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接反映出细胞损伤的程度。

　　本实验结果显示，使用中、高剂量金匮护肝汤后，小鼠血清中AST、ALT和模型组相比，活性明显降低，并呈现一定的剂量依赖性，MDA含量显着减低，SOD含量显着升高，证明金匮护肝汤有保护CC1 所导致的急性肝损伤作用。其作用机制可能与提高血清中ALT、AST活性，降低抗氧化能力有关。