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米非司酮抑制人子宫内膜基质细胞增殖
目的 在改良子宫内膜细胞原代分离培养方法的基础之上,探讨米非司酮对原代分离培养的人子宫内膜基质细胞增殖的抑制作用. 方法 利用改良后的“二次消化法”分离培养增殖期人子宫内膜基质和上皮细胞,进行细胞形态学观察,并通过流式细胞术检测入子宫内膜基质和上皮细胞的波形蛋白和角蛋白表达阳性的细胞比率,计算分离培养的基质和上皮细胞的纯度;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测米非司酮对原代分离培养人子宫内膜基质细胞的半数抑制浓度(IC50).结果 原代分离培养的基质细胞较上皮细胞生长迅速.流式细胞检测结果显示,分离培养的基质细胞波形蛋白阳性率达97％,上皮细胞角蛋白阳性率达90％.米非司酮处理人子宫内膜基质细胞2d或3 d后,结果均显示,随着米非司酮浓度增加,基质细胞的细胞抑制率(IR)逐渐升高.米非司酮作用基质细胞2d后,50和100μmol/L组的IR值均高于对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.05);米非司酮作用3d后,25、50和100 μmol/L组的IR值均高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).通过对IR值进行直线回归分析,结果表明:米菲司酮处理2 d和3 d对原代入子宫内膜基质细胞的IC50分别为52.85μmol/L和86.46μmol/L. 结论 改良后的“二次消化法”可获得高纯度人子宫内膜基质细胞和上皮细胞.米非司酮对原代人子宫内膜基质细胞有抑制作用,并呈时间和剂量依赖效应.
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HCG对人子宫内膜细胞VEGF表达调控的初步研究
目的：：探讨人子宫内膜细胞体外培养模型中,HCG对VEGF表达的调控作用和机制。方法：采用机械分离加梯度离心法分别获得腺上皮与基质细胞进行体外原代细胞混合培养；实验设对照组、HCG组(对照组使用常规DF/12培养液提取总蛋白；HCG组在 DF/12培养液中加终浓度为20 U/ml HCG )。采用 Q-PCR 测定子宫内膜细胞中VEGF mRNA表达水平。免疫组化或荧光法进行LH-R和VEGF蛋白质定位表达,West-ern blot法测定蛋白半定量表达。结果：子宫内膜腺上皮与基质细胞均存在LH/HCG-R和VEGF蛋白表达。 HCG对子宫内膜细胞VEGF蛋白的峰值作用时间点为24 h。与对照组相比,20 IU/ml HCG体外干预24 h后,子宫内膜细胞VEGF mRNA和蛋白质水平均显著上调(Q-PCR：1 vs 2.0132±0.6024；WB：0.4069±0.1897 vs 0.7781±0.1651)(P均<0.05)。结论：成功建立了人子宫内膜细的体外培养模型,并完成 HCG 的干预实验。 HCG 与HCG/LH-R结合后上调子宫内膜细胞VEGF的基因和蛋白质水平表达。
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米非司酮可诱导人子宫内膜细胞的凋亡和坏死
目的：：探讨米非司酮对人子宫内膜细胞凋亡和坏死的影响。方法：体外培养人子宫内膜细胞，采用不同浓度米非司酮处理，观察米非司酮对细胞形态的影响， MTT法检测米非司酮对细胞增殖能力的影响，检测米非司酮处理细胞后子宫内膜发育相关基因ESR1和PGR的含量、坏死途径蛋白p-MLKL、RIPK3的表达和凋亡途径蛋白Bax、pro-caspase3/caspase3的变化。结果：经米非司酮处理后，人子宫内膜细胞细胞形态明显变差，细胞增殖能力明显变弱，且随着米非司酮处理浓度增加，其对细胞生长的毒性作用加强；米非司酮处理的细胞中ESR1和PGR含量明显减少，而坏死途径蛋白p-MLKL、RIPK3表达和凋亡途径蛋白Bax、pro-caspase3/caspase3表达增加。结论：米非司酮可促进人子宫内膜细胞的凋亡和坏死而抑制其细胞增殖，其作用可能与调节ESR1/PGR含量、坏死途径蛋白p-MLKL/RIPK3及凋亡途径蛋白Bax/pro-caspase 3/caspase 3表达有关。
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米非司酮对人子宫内膜细胞凋亡及促血管生成因子表达的影响
目的:探讨米非司酮对人子宫内膜细胞凋亡以及促血管生成因子血管生成素1(Ang 1)、血管生成素2(Ang2)、血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞因子(bFGF)表达水平的影响.方法:采用MTS法检测不同浓度米非司酮对子宫内膜细胞的毒性,采用Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术和Western Blot检测细胞凋亡,并用实时荧光定量聚合酶链反应检测促血管生成因子的表达.结果:米非司酮浓度增加,细胞活力随之减小;米非司酮作用时间增长,细胞活力随之减小,24、48、72小时的IC 50分别为18、15、12 μg/ml.与对照组相比,不同浓度的米非司酮对子宫内膜细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),Caspase蛋白表达水平降低.15 μg/ml的米非司酮对细胞48小时处理后,与对照组相比,Ang-1和bFGF基因表达水平显著降低(P＜0.01),而VEGF与Ang-2基因表达水平明显增加(P＜0.05).结论:米非司酮能诱导人子宫内膜细胞凋亡,促血管生成因子VEGF与Ang-2的高表达以及Ang-1和bFGF的低表达,这可能是米非司酮治疗围绝经期功能失调性子宫出血的重要机制.
