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自噬相关蛋白Beclin-1在ⅢB期结肠癌的表达及其与预后关系
目的:自噬是细胞利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程,是真核细胞的一种死亡形式.自噬在肿瘤发生发展中的作用尚不完全清楚.Beclin-l是一种双等位抑癌基因且是哺乳动物参与自噬的特异性基因.本研究观察肿瘤细胞自噬水平变化对ⅢB期结肠癌患者预后的影响.方法:收集我院1999年1月～2003年7月经过根治性手术治疗并有完整随访资料的115例ⅢB期结肠癌组织标本,用免疫组化方法观察自噬相关蛋白Beclin-l在癌组织与癌旁正常粘膜表达情况,分析beclin-1表达水平与患者临床病理参数关系及与患者预后的关系.结果:Beclin-l蛋白表达于肿瘤细胞膜、胞浆和(或)细胞核,正常粘膜缺乏Beclin-l表达.肿瘤组织Beclin-l阳性率达85.2%(98/115);Beclin-l表达者的5年生存率较高(67.3%vs47.1%).此外,Beclin-l表达与患者其它临床病理参数如年龄、性别、发病部位、病理类型、细胞分化程度及T分期无相关性.结论:局部晚期结肠癌细胞保留自噬功能没有提高肿瘤细胞的生存能力,而丧失自噬功能可能促进肿瘤进展.
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紫草素诱导甲状腺髓样癌TT细胞自噬的实验研究
目的 探讨紫草素能否诱导甲状腺髓样癌细胞发生自噬.方法 采用透射电镜观察不同浓度紫草素对甲状腺髓样癌TT细胞发生自噬的形态.利用Western-blot分析紫草素作用甲状腺髓样癌TT细胞后自噬标志物Beclin-l和LC3蛋白的表达,利用荧光显微镜观察自噬标记蛋白LC3-Ⅱ的点状聚集情况.结果 不同浓度紫草素作用24~72h对TT细胞均有自噬现象发生.2μg/mL、4μg/mL紫草素处理组作用24h后透射电镜观察TT细胞自噬的形态,发现TT细胞出现典型的自噬囊泡:双层膜包绕的圆形或椭圆形结构.紫草素处理自噬相关基因Beclin-l的表达明显低于空白对照组,参与自噬降解的p62表达水平下降,其下降水平与剂量呈相关性,自噬标记蛋白LC3-Ⅱ的表达明显提高.将TT细胞转染GFP-LC3质粒24h后,用紫草素处理24h,于荧光显微镜下观察,处理组与空白对照组相比,胞浆上出现大量的LC3-Ⅱ点状聚集.结论 紫草素能诱导甲状腺髓样癌TT细胞发生自噬,透射电镜下可见自噬体,荧光显微镜下可观察到自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ.紫草素诱导TT细胞自噬,可能与降低自噬抑制基因Beclinl表达水平相关.
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系统性红斑狼疮患者自噬相关基因的表达
目的:检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)自噬相关基因Beclin-l、微管相关蛋白-1轻链3(MAPLC3)的表达.方法:采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对40例SLE患者和20例正常对照检测自噬相关基因Beclin-l及MAPLC3 mRNA的表达.结果:与正常对照组相比,SLE患者组PBMC中MAPLC3 mRNA的表达明显增强,尤以活动期SLE患者更为显著.SLE患者组Beclin-1 mRNA表达水平与正常对照组相比无显著差异,但活动期SLE患者Beclin-1 mRNA表达水平则明显高于正常对照组.结论:SLE患者PBMC的自噬可能参与了SLE的发病.
关键词： 红斑狼疮 系统性 外周血单个核细胞 微管相关蛋白-1轻链3 Beclin-l -
miR-216b通过靶向调控Beclin-1的表达抑制宫颈癌细胞自噬
目的 研究miR-216b影响宫颈癌HeLa细胞自噬的作用机制.方法 转染miR-216b及应用其抑制剂后,利用GFP-LC3 shRNA转染等方法检测HeLa细胞的自噬水平,Western blot检测自噬相关基因Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达变化.结果 HeLa细胞转染miR-216b后,HeLa细胞中自噬相关基因Beclin-1受到抑制,LC3-Ⅱ的表达增加,细胞自噬受抑,而抑制miR-216b的表达,自噬水平升高.进一步研究发现,miR-216b能够通过靶结合Beclin-1 3'UTR抑制Beclin-1表达从而抑制细胞自噬的发生.结论 miR-216b能够抑制宫颈癌HeLa细胞发生自噬,为宫颈癌的临床治疗提供了的理论基础.
