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逆转录病毒载体介导针对RANKL的重组蛋白对小鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨重组蛋白核因子-κB(NF-κB)受体活化因子(RANK) -Fc对小鼠肝缺血再灌注损伤保护作用及可能的机制.方法 据不同处理将小鼠随机分为无血清培养基对照组( Sham组)；目地基因病毒组(RANK-Fc组)；空载体病毒组(eGFP组),各组均经尾静脉将2.5ml溶液(含或不含病毒)6 s内注入.3d后RANK-Fc及eGFP组建立70％肝缺血再灌注损伤模型,热缺血90 min后再灌注不同时间,Sham组行假手术.各组均在1、3、6及24h剖杀小鼠5只,留取血清及肝组织标本.RT-PCR法检测eGFP mRNA表达,Western印迹检测RANK-Fc蛋白表达.HE染色组织学变化及肝脏酶学水平用于肝损伤判断,Western印迹及免疫组织化学方法测定NF-κB的活化程度.c-Jun氨基末端激酶(JNK)活化水平亦经Western印迹检测.酶联免疫吸附测定法定量检测组织匀浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平.细胞凋亡情况由TUNEL法判断.相同时间点各组间比较采用单因素方差分析,两两比较用t检验.结果 应用流体力学体内转染方法,RANK-Fc及eGFP在肝脏成功表达.相同时间点RANK-Fc组[ALT(U/L):1149±109、1574±258、2778±217、461±65;AST( U/L):1027±276、1467±236、2208±378、506±160]肝脏酶学水平均较eGFP组[ALT(U/L):2828±345、5194±944、8403±806、969±147;AST(U/L):2770±343、4778±684、8050±1160、977±115]改善(P＜0.01).与eGFP组相比,RANK-Fc组小鼠肝细胞NF-κB p65(t=6.726)及JNK(t =6.713)表达水平降低,促炎症介质TNF-α[(235±56)比(527±109) pg/ml,t=4.779]、IL-6[(303±73)比(702±126) pg/ml,t =5.482]水平降低,差异均有统计学意义(均P＜0.01),免疫组织化学检查显示细胞核NF-κB阳性染色细胞数减少,HE染色显示肝组织学病变减轻,TUNEL染色阳性细胞显著减少.结论 RANK-Fc对小鼠缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制至少通过部分阻断NF-κB介导的炎症反应及JNK介导的促凋亡而实现.
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炎症因子白介素-6对骨细胞表达RANKL的影响
目的:通过研究炎症因子白介素-6对骨细胞表达核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)的影响,为更好地理解炎症因子在骨细胞参与骨重塑中的作用,提供理论基础.方法:体外培养MLO-Y4细胞系细胞,并应用不同浓度的人工合成白介素-6(IL-6)和白介素-6受体(IL-6R),共同作用刺激骨细胞24 h后,采用实时荧光定量PCR、免疫印迹试验、免疫荧光等方法,检测RANKL以及酪氨酸激酶2(JAK2)的磷酸化蛋白的表达变化.结果:应用不同浓度人工合成的IL-6和IL-6R,共同作用刺激骨细胞后,RANKL的表达水平随着IL-6的浓度增加而增加,并且IL-6通路中的JAK2蛋白磷酸化亦增加,提示IL-6及其受体可以促进骨细胞表达RANKL,并且与JAK2的活化密切相关.结论:炎症因子IL-6可以通过增加JAK2蛋白的磷酸化,来促进骨细胞表达RANKL.
关键词： 骨细胞 核因子-κB受体活化因子配基 白介素-6 白介素-6受体 酪氨酸激酶2 -
核因子-κB受体活化因子配体在大鼠正畸牙压力侧骨改建中的作用
目的:初步探讨在正畸牙移动压力侧核因子-κB受体活化因子配基(receptor activator of nuclearfactor-κB ligand, RANKL)的表达在破骨细胞诱导和骨改建中的调节作用.方法:建立大鼠正畸牙移动模型,利用免疫组化的方法对压力侧RANKL的表达及其变化进行检测;并进一步观察了RANKL对大鼠骨髓破骨细胞形成的影响.结果:正畸牙移动压力侧组化结果显示,RANKL阳性表达位于牙周膜细胞和位于骨陷窝内的破骨细胞中,在正畸牙移动第3、5和7天时呈强阳性表达.体外破骨细胞诱导实验结果显示,在巨噬细胞集落刺激因子(macrophage clone stimulating factor, M-CSF)协同作用下,RANKL呈剂量依赖型诱导TRAP阳性细胞生成.结论:大鼠正畸牙移动中,RANKL在压力侧的表达上调有诱导破骨细胞形成的作用,并导致牙槽骨吸收.
关键词： 核因子-κB受体活化因子配基 骨改建 破骨细胞
