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铁调素绿色荧光蛋白转基因对斑马鱼成骨代谢的影响
目的 探讨铁调素抑制对于成骨代谢影响的机制.方法 以受精后0.5h斑马鱼的受精卵予以构建好的铁调素基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒进行显微注射受精卵,连续120 h每间隔6h观察铁调素在斑马鱼中的表达.在同等情况下对同时注射ATG吗啉环反义寡核苷酸和绿色荧光蛋白质粒后的幼鱼于第4天进行铁染色,与野生型比较观察铁含量变化.于第9天分别进行茜素红染色,比较硬骨的形态差异.对注射ATG吗啉环反义寡核苷酸和GFP后的幼鱼于第4天提取的cDNA采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测相关成骨代谢的基因表达,比较和绿色荧光蛋白组的成骨下游基因的差异.结果 对注射铁调素基因绿色荧光蛋白转基因的120 h的观察中发现铁调素基因72 h在斑马鱼中开始表达,96 h时强烈,ATG吗啉环反义寡核苷酸后第4天斑马鱼进行铁染色,与GFP相比色素沉着明显变深,对注射ATG吗啉环反义寡核苷酸后第9天斑马鱼进行茜素红染色与绿色荧光蛋白组染色相比,硬骨茜素红染色变浅且肋骨及尾鳍未发育,注射ATG吗啉环反义寡核苷酸后第4天的斑马鱼做定量FQ-PCR进行检测相关成骨代谢的基因表达量与GFP组斑马鱼成骨基因表达相比均下调.结论 铁调素绿色荧光蛋白转基因斑马鱼在体内表达强烈,而抑制铁调素的表达造成斑马鱼体内铁蓄积,使得斑马鱼的成骨基因降低,造成骨发育迟缓,骨量减低.
