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高效液相色谱-串联质谱法同时测定动物源食品中3种抗菌类药物残留
利用高效液相色谱-电喷雾串联质谱(HPLC-ESI-MS/MS)技术，建立了同时测定动物源食品中3种抗菌类药物残留量的分析检测方法。对色谱、质谱条件进行优化，样品采用环己烷-乙酸乙酯（V/V=1：1）提取，无水硫酸钠除水分，正己烷去脂肪，经GPC富集浓缩目标化合物，旋转蒸发后定容。以0.1％甲酸-甲醇溶液为流动相，经Hypersil GOLD aQ色谱柱分离后，LC-MS/MS多反应监测模式分析，外标法定量，结果表明：3种目标化合物在100.00~1000.00 ng/mL 浓度下线性良好（R2≥0.9900），添加低、中、高三个水平浓度时，目标化合物的平均回收率为70.07%～85.36%，相对标准偏差小于9.5%。方法检出限为0.15～0.3μg/kg，定量下限为0.5~1.5μg/kg。
关键词： 高效液相色谱-质谱联用 动物源食品 乙酰甲喹 卡巴氧 恩诺沙星 -
高效液相色谱-质谱联用法测定牛奶中9种氟喹诺酮类药物残留的研究
氟喹诺酮类(fluoroquinolones,FQNS)是新一代合成广谱抗菌药.据统计,在医院用量上呈逐年增加.随着临床用量的加大,不良反应报道也逐渐增多.此外,氟喹诺酮类也是兽医临床上的常用药品,动物用药后的药物残留可以通过食物链传播,同样会引起人类不良反应现象的发生,影响人类健康.为此,对动物体内FQNS的残留检测已越来越受到人们的关注.目前常见的氟喹诺酮残留检测方法主要有高效液相色谱、液相色谱一质谱联用法以及液相色谱串联质谱联用法等[1-4],液相色谱一质谱联用法已较多用于卫生检测中[5-12],本研究建立了一种利用高效液相色谱一质谱联用法同时测定牛奶中9种氟喹诺酮类药物残留的检测方法.
关键词： 牛奶 氟喹诺酮 高效液相色谱-质谱联用 -
高效液相色谱——质谱联用技术在中药成分分析中的应用
高效液相色谱-质谱联用技术自诞生以来飞速发展,在中药成分分析中已得到广泛应用.本文介绍了近年来HPLC-MS联用技术在中药指纹图谱建立、结构鉴定以及定量分析等方面的应用及其发展前景.
关键词： 高效液相色谱-质谱联用 中药指纹图谱 结构鉴定 定量分析 -
不同厂家生产的丹参注射液色谱指纹图谱的比对研究
目的:比较不同厂家丹参注射液的质量,并应用对照品对照和高效液相色谱-质谱联用技术对其主要成分进行定性分析.方法:采用zorbax Extend C18色谱柱,以乙腈-0.05%三氟乙酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速为0.8mL·min-1,检测波长为288nm,测定了18个不同厂家生产的丹参注射液的HPLC-UV指纹图谱以及代表性厂家注射液的HPLC-DAD-MS图谱.结果:18个不同厂家生产的丹参注射液在所含化学成分的数目和含量上差异显著;利用对照品对照和HPLC-DAD-MS技术指认了丹参注射液中的15个酚酸类成分.结论:本方法可用于测定不同来源的丹参注射液的色谱指纹图谱,并为丹参注射液的全面质量评价和生产工艺监控提供了可行的方法.
关键词： 丹参 丹参注射液 指纹图谱 高效液相色谱-质谱联用 -
HPLC-MS-MS分析桑叶总生物碱组成及含量
目的:采用HPLC-MS-MS法,对桑叶总生物碱部位中的各生物碱成分进行分析和鉴别,采用柱前衍生化HPLC-UV测定生物碱部位中总生物碱的含量.方法:采用HiQSiL C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以9-氯甲酸芴甲酯(FMOC-C1)为柱前衍生化试剂,流动相乙腈-0.1％醋酸(50:50),流速0.8 mL·min-1,检测波长254 nm,电喷雾离子源(ESI),正离子检测模式,以1-脱氧野尻霉素(DNJ)为对照,外标法计算桑叶总生物碱含量.结果:鉴定了6个生物碱类成分分别为DNJ,fagomine,3-epi-fagomine,DAB,calystegine B2和2-O-β-Glc-DAB;测定3批供试品中总生物碱含量均达到75％以上.结论:该法简便、准确、灵敏,可用于桑叶总生物碱及其制剂的定性定量分析.
关键词： 桑叶 1-脱氧野尻霉素 总生物碱 高效液相色谱-质谱联用 含量测定 -
益心舒片的HPLC指纹图谱
目的:建立益心舒片的HPLC指纹图谱,为益心舒片的质量评价提供方法.方法:样品经75％甲醇提取后,采用Waters Symmetry ShieildTMC18色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5μm)进行检测,以乙腈-0.5％甲酸水为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长260 nm,柱温30℃.采用国家药典委员会出版的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2012年版),对10批不同批次的益心舒片化学成分指纹图谱进行相似度计算,并且通过对照品比对及高效液相与质谱联用技术(HPLC-MS)对主要共有峰进行指认.结果:10批益心舒片指纹图谱中有29个共有峰,各峰分离度良好,各批次间共有峰的相对保留时间RSD均＜1.0％,样品间相似度均＞0.9,共指认出12个峰.结论:该方法具有良好的精密度、重复性、稳定性,各共有峰间分离度高,可用于益心舒片的质量综合评价.
关键词： 益心舒片 高效液相色谱-质谱联用 指纹图谱 -
液质联用色谱法同时测定降糖类中成药中9种非法添加的化学成分
目的:建立高效液相色谱法同时测定降糖类中成药中9种非法添加的化学成分.方法:采用C18色谱柱,以甲醇-0.1 mol·L-1乙酸铵溶液梯度洗脱,检测波长235 nm,柱温35℃,同时进行全波长扫描(190 ～400 nm),并对可疑成分进行质谱确认.结果:9种对照品在各自浓度范围内,呈现良好的线性关系(r≥0.999 9),精密度、稳定性、检出限、定量限、回收率均符合规范,并检出降糖宁中非法添加了格列本脲.结论:该方法简便快速准确,适用于上述降糖类化学成分的检测.
关键词： 中成药 非法添加 降糖类化学成分 高效液相色谱-质谱联用 -
白芍中芍药苷和芍药内酯苷在大鼠血浆中含量测定及药动学研究
目的 建立测定大鼠血浆中芍药苷和芍药内酯苷含量的高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)方法,并用于研究其在大鼠体内的药动学特征.方法 采用HPLC-MS/MS方法,色谱柱为Ultimate RXB-C18(2.1 mm×100 mm,3μm),流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液(30:70,V/V),流速0.3 mL/min,柱温30℃,进样量5μL,检测波长230 nm;定量离子对为:m/z 525→120.9(芍药苷和芍药内酯苷)、m/z 433→224.8(内标物栀子苷).8只雄性SD大鼠,给予6 g原药材/kg白芍汤灌胃,分别于0、5、10、20、30、45、60、90、120、180、360、540、720 min眼眶静脉取血0.5 mL,测定血药浓度,采用DAS V2.1.1药动学软件计算其主要药动学参数.结果 芍药苷和芍药内酯苷分别在40～8000 ng/mL和40～10000 ng/mL范围内线性关系良好(r值分别为0.9996和0.9995),日内和日间精密度RSD均小于6％,提取回收率分别为92.33％～95.43％和88.65％～95.62％,基质效应分别为99.29％～107.86％和93.79％～104.05％,方法学考察均符合要求.主要药动学参数:芍药苷、芍药内酯苷Cmax分别为(8.50±2.01)、(4.13±0.72)μg/mL,tmax分别为(10.00±1.73)、(20.00±2.11)min,t1/2分别为(142.98±30.11)、(127.68±35.74)min.结论 本研究所建立的HPLC-MS/MS方法简单可行、准确可靠、灵敏度高、专属性强,可应用于研究与分析芍药内酯苷和芍药苷在大鼠体内的药动学特征.
关键词： 高效液相色谱-质谱联用 芍药苷 芍药内酯苷 药动学 大鼠 -
酸枣仁总黄酮在大鼠尿液和粪便中的代谢与排泄
目的:研究酸枣仁总黄酮在大鼠尿液和粪便中的代谢与排泄.方法:将SD大鼠灌胃酸枣仁总黄酮提取物后,于不同时间收集尿液和粪便.经大孔吸附树脂处理尿液和粪便,采用高效液相色谱(HPLC)和高效液相色谱-质谱联用(LC-MS~n)法检测尿液和粪便中的原型药和代谢产物.结果:在尿液和粪便中均检测到总黄酮中的主要化合物酸枣仁黄酮碳苷和6'''-阿魏酰酸枣仁黄酮碳苷,并发现一个主要代谢产物酸枣仁黄酮次级碳苷(M_1).结论:酸枣仁总黄酮在大鼠尿液和粪便中主要以原型药酸枣仁黄酮碳苷和6'''阿魏酰酸枣仁黄酮碳苷的形式排出,少量以代谢产物的形式如酸枣仁黄酮次级碳苷排泄.
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脉络宁注射液中5种酚酸类成分血药浓度的LC-MS/MS测定及大鼠体内药代动力学研究
通过建立准确灵敏的LC-MS/MS法,测定8只SD大鼠,单剂量尾静脉注射(4 mL·kg-1)脉络宁注射液后,血浆中绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰基奎宁酸(3,4-DCQA)、阿魏酸、肉桂酸的浓度,所测数据使用DASver 1.0软件进行处理,计算主要药动学参数.结果显示,绿原酸、咖啡酸、3,4-DCQA、阿魏酸、肉桂酸的线性范围分别为2.006～1 027 μg·L-1(r=0.999 6),1.953 ～1 000 μg·L 1(r =0.999 7),28.51 ～1.459×104μg·L 1(r =0.998 9),1.836 ～940.0 μg·L 1(r =0.997 7),4.780～2447 μg·L-1(r=0.9986).方法学考察5种酚酸类成分血浆样品反复冻融3次、-75℃放置20 d、室温放置4h以及血浆样品处理后的分析物放置24 h的稳定性均良好,日内、日间变异系数(RSD)小于5.0％,精密度和准确度等均符合生物样品分析的要求.大鼠体中绿原酸药代参数:t1/2为(49.78±12.81) min,AUC0t为(123.55±14.82) mg·min·L-1,CL为(0.004 3±0.000 5)L·min-1;咖啡酸药代参数t1/2为(36.65±10.59) min,AUC0t为(91.67±11.77) mg·min·L-1,CL为(0.005 7±0.000 7)L·min-1;3,4-DCQA药代参数:t1/2为(50.08±13.78) min,AUC0t为(278.34 ±31.82) mg·min·L-1,CL为(0.001 6±0.000 2)L·min-1;阿魏酸药代参数t1/2为(51.39±15.52) min,AUC0t为(34.72±4.67) mg·min·L-1,CL为(0.0004±0.000 1)L·min-1;肉桂酸药代参数t1/2为(74.42 ±18.32) min,AUC0t为(34.63±4.82) mg·min·L-1,CL为(0.007 7 ±0.001 1)L·min-1.该文所建立的LC-MS/MS适用于绿原酸等5种酚酸类成分的药代动力学研究.
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Beagle犬口服雷公藤片血浆中雷公藤红素LC-MS/MS测定及药动学研究
建立Beagle犬血浆中雷公藤红素的LC-MS/MS检测方法,用于Beagle犬口服雷公藤片的药代动力学研究.血浆样品经二氯甲烷提取,色谱条件为Phenomenex Luna Cs色谱柱(2.0 mm×50 mm,3μm),流动相为甲醇-乙腈异丙醇溶液(1∶1)-0.1％甲酸15∶ 55∶30;多反应监测(MRM)雷公藤红素([M+H]+,m/z 451.3/201.1)和内标泼尼松龙([M+H]+,m/z 361.1/147.1);DAS 1.0软件对雷公藤红素药-时曲线进行拟合,并计算药代动力学参数.在0.680 0 ～ 136.0 μg·L-1,雷公藤红素与内标的峰面积比值与浓度的线性关系良好,定量限为0.6800 μg·L-1,日内日间精密度小于6.15％,提取回收率为50.42％～51.65％.Beagle犬口服雷公藤片(1片/kg),血浆中雷公藤红素经时变化符合一室模型(w=1/cc),主要药动学参数分别为Cmax(35.64±9.540) μg· L-1,Tmax(2.62±0.69) h,T1/2 (2.93±0.29)h,CL(0.308±0.056)L·kg-1· h-1,AUC0-12(131.16±31.94) μg·L·h-1,AUC0-∞(142.83±37.57) μg·L·h-1.建立的LC-MS/MS分析方法准确灵敏,适于雷公藤片中雷公藤红素药代动力学研究.
关键词： 雷公藤红素 雷公藤片 高效液相色谱-质谱联用 药代动力学 -
HPLC-MS测定大鼠血浆中青蒿素浓度及其应用
目的:建立青蒿素大鼠体内药物浓度的分析方法.方法:采用高效液相色谱-质谱联用技术,选用艾司唑仑为内标,样品与内标使用甲基叔丁基醚提取,并分别于m/z305,296进行测定.结果:在5～500μg·L-1,青蒿素峰面积与内标峰面积比值与浓度有良好的线性关系,低定量质量浓度为5 μg· L-1.结论:方法学证明该法能够满足青蒿素大鼠体内血药浓度的测定,可用于动物体内药物动力学的研究需求.
关键词： 青蒿素 高效液相色谱-质谱联用 药物动力学 -
国产与进口格列齐特缓释片人体生物等效性研究
目的 评价格列齐特缓释片试验制剂和市售参比制剂的人体生物等效性. 方法 采用高效液相色谱-质谱联用技术,以内标法测定20名男性健康受试者单次和多次交叉给予格列齐特缓释片后的血药浓度经时过程,估算药代动力学参数. 结果 口服格列齐特缓释试验片(30mg)和参比片(30mg)后,受试及参比制剂中药物主要药代动力学参数如下:单次给药时达峰浓度(Cmax)分别为1.21±0.26μg/ml和1.09±0.24μg/ml,达峰时间(Tmax)分别为7.4±1.8h 和7.0±1.6h,消除半衰期t1/2(Kel)分别为14.82±4.10h和13.57±4.16h,AUC0～72分别为26.23±8.65μg*h*ml-1和25.88±8.87μg*h*ml-1,AUC0～∞分别为27.65±9.80 μg*h*ml-1和27.12±9.90μg*h*ml-1;多次给药时Cmax分别为1.37±0.49 μg/ml和1.31±0.41μg/ml;谷浓度(Cmin)分别为0.069±0.075μg/ml和0.060±0.066μg/ml;平均稳态血药浓度(Cav)分别为0.41±0.20μg /ml和0.42±0.19μg/ml;Tmax分别为6.0±1.7h 和6.6±2.6h;波动系数(DF)分别为3.46±0.99和3.29±1.06;稳态药时曲线下面积(AUCss)别为29.66±14.10 μg*h*ml-1和29.95±13.40 μg*h*ml-1.AUC 和AUCss经对数转换后方差分析检验,差异无统计学意义. 结论 试验制剂和参比制剂生物等效.
关键词： 格列齐特 缓释片 生物等效性 高效液相色谱-质谱联用 -
卵巢癌尿液代谢物构成与临床分期相关性分析
目的 探讨卵巢癌患者尿液代谢物构成与临床分期的相关性.方法 收集2010-12-01-2012-09-30山东大学齐鲁医院56例原发性上皮性卵巢癌住院患者和15名健康志愿者晨尿,提取其代谢物,用高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)对代谢物进行检测,用主成分分析(PCA)和偏小二乘法-判别分析(PLS-DA)对质谱数据进行分析,并对筛选出的代谢物进行数据库检索和比对,及单因素方差分析和小显著差t检验.结果 尿液样品经HPLC-MS检测后用PCA进行分析,结果显示健康人和不同临床分期卵巢癌患者的样品点在得分图中存在分离趋势.用PLS-DA作进一步分析,分类结果较PCA得到明显改善,R2X=0.757,R2Y=0.977,Q2Y=0.87,表明该模型稳定性和预测性较好.通过对变量投影重要性(variable importance in projection,VIP)和相关系数得到的差异点进行非配对双尾t检验,及对有统计学意义的差异点进行数据库检索和比对,筛选出体现健康人与不同临床分期卵巢癌患者之间代谢差别的尿中代谢物,分别为N-乙酰神经氨酸-9-磷酸、5'-甲硫腺苷、尿酸-3-核苷、假尿嘧啶核苷、L-缬氨酸、琥珀酸、L-脯氨酸及β-烟酰胺单核苷酸.单因素方差分析显示,这些化合物在正常人和不同临床分期的卵巢癌患者尿液中相对含量,差异有统计学意义,P＜0.05;且随着卵巢癌患者病情的发展呈现增高趋势.结论 不同临床分期卵巢癌患者尿液代谢物构成存在差异,卵巢癌患者尿液代谢物构成与临床分期有相关性.
关键词： 卵巢肿瘤 尿液 代谢组学 高效液相色谱-质谱联用 肿瘤分期 -
乳酸左氧氟沙星片生物等效研究
目的 建立人血浆中乳酸左氧氟沙星的HPLC-MS测定方法,研究乳酸左氧氟沙星片的药代动力学及生物等效性.方法 人体实验采用双交叉设计,22名健康受试者交叉口服两个厂家的乳酸左氧氟沙星片,服药后0.33～24h内间隔取血,用HPLC-MS法测血浆中的左氧氟沙星浓度,计算主要药动学参数,评价生物等效性.结果 乳酸左氧氟沙星片相对生物利用度为108.1～123.3%.结论 本实验建立的分析方法 灵敏、准确、简便,统计学结果 表明两种制剂生物等效.
关键词： 乳酸左氧氟沙星 药代动力学 生物等效性 高效液相色谱-质谱联用 -
重组嵌合抗CD20 IgG1型单克隆抗体的结构验证
本文选择一种重组嵌合抗CD20 IgG1型单抗.应用液质联用仪及N-末端测序仪对其进行结构验证.对该单抗进行还原、烷基化、酶解等处理后,对其氨基酸序列、二硫键配对方式、糖链类型及糖基化位点进行分析测定.结果显示,该单抗轻、重链氨基酸序列与理论一致.通过液质肽图的解析,对单抗10条二硫键的配对方式进行了验证;通过比较单抗重链切糖前、后的相对分子质量,预测单抗所含糖链类型为岩藻糖化的双触角复杂型N-糖,糖基化位点位于重链的Asn301上.本方法可为该类重组单抗制品的质量控制及其参考品的结构确证提供参考.
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盐酸多奈哌齐胶囊及片剂的人体生物等效性研究
目的建立人血浆中盐酸多奈哌齐的HPLC-MS (quadrupole)测定方法,研究盐酸多奈哌齐在正常人体内的药代动力学行为,评价其两种制剂的生物等效性.方法人体实验采用双交叉设计,20名健康受试者交叉口服国产盐酸多奈哌齐胶囊和进口片剂,服药后0.5～192 h内间隔取血.血样加入内标(盐酸非洛普)经预处理后用HPLC-MS(quadrupole)法测定,检测离子为m/z 380(多奈哌齐)、m/z 344(内标),裂解电压为120 V.计算主要药动学参数,并以片剂为参比制剂,估算国产胶囊的相对生物利用度,判断生物等效性.结果国产及进口盐酸多奈哌齐制剂的生物半衰期分别为(63±10) h和(57±9) h,达峰时间分别为(3.3±0.4) h和(3.4±1.0) h,峰浓度分别为(8.5±0.4) μg*L-1和(8.1±1.0) μg*L-1.以进口制剂为对照,用AUC0-192计算的国产胶囊相对生物利用度为102%±11%.结论本实验建立的分析方法灵敏、准确、简便,统计学结果表明两种制剂生物等效.
关键词： 多奈哌齐 药代动力学 生物等效性 高效液相色谱-质谱联用 -
HPLC-MS测定黄芪药材中3种成分的含量
黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.的干燥根,具有补气固表、利尿脱毒、敛疮生肌等功效[1].
关键词： 高效液相色谱-质谱联用 黄芪药材 毛蕊异黄酮苷 黄芪甲苷 芒柄花素 -
基于生物分子网络的槲皮素生物效应机制
运用代谢组学及生物效应网络方法研究槲皮素生物效应的机制.采用高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用技术测定空白组与槲皮素给药组大鼠血清,质谱数据采用MATLAB软件处理,利用偏小二乘辨别法分析空白组、槲皮素给药组之间的代谢差异,并通过变量重要性投影选取潜在的生物标志物,结合质谱信息和数据库检索对潜在的生物标志物进行鉴定,确定了4个化合物的结构、代谢途径,以及相关的酶和作用靶点,分别为维生素A酸及视黄醛酸受体(RARβ)、花生四烯酸和COX-2同工酶、3,5-二碘酪氨酸及甲状腺过氧化物酶(TPO)、尿苷二磷酸葡萄糖和磷酸二酯酶(PDEs).通过生物效应网络并结合相关文献证明槲皮素可使维生素A酸对视黄醛酸受体(RARβ)的诱导能力增强、活化甲状腺过氧化物酶(TPO)、还可作为COX-2同工酶和磷酸二酯酶(PDEs)的抑制剂.该研究在生物分子网络调控的层面阐释了槲皮素的多种生物效应,说明代谢组学及生物效应网络方法能用于槲皮素生物效应机制的研究,为进一步揭示药物作用机制提供了新方法.
关键词： 槲皮素 代谢组学 生物分子网络 高效液相色谱-质谱联用 -
降香药材色谱指纹图谱的建立及其在药材鉴定中的应用
目的建立评价降香药材质量的液相色谱指纹图谱分析方法,并采用液相色谱-质谱联用技术对其主要成分进行定性分析.方法采用Phenomenex Luna C18色谱柱,以乙腈-0.3%醋酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为275 nm,测定了37批不同来源的降香药材的HPLC-UV指纹图谱以及其中3批代表性药材的HPLC-DAD-MS图谱.结果根据指纹图谱相似度分析结果,将降香药材分为3类;利用HPLC-DAD-MS技术分析了3类药材化学组成上的异同,并分别在3类药材中指认了10个,7个和2个酚性成分.结论本方法可用于降香药材的指纹图谱测定,并为其质量评价提供可靠依据.
关键词： 降香 指纹图谱 高效液相色谱-质谱联用
