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合川补骨脂药材HPLC指纹图谱研究
目的:建立补骨脂药材的指纹图谱,从整体上控制补骨脂药材的质量.方法:采用HPLC法,用二级管阵列进行检测,以补骨脂素、异补骨脂素和补骨脂黄酮类成分分离效果为评价指标,筛选流动相及检测波长.结果:以70%乙醇回流提取1h,用乙腈-0.1%乙酸梯度洗脱效果较佳,检测波长为315 nm.补骨脂药材在组分上相似度较好.结论:经统计分析,该法稳定,重现性好,简便可行,适用于补骨脂药材的质量控制.
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基于偏小二乘法判别分析(PLS-DA)的补骨脂炮制前、后组成二神丸提取物的指纹图谱研究和指标成分的定量分析
目的: 通过对已建立的二神丸提取物指纹图谱进行化学计量学分析,并结合含量测定,为补骨脂炮制前、后组成二神丸提取物的鉴别和有效质量控制提供参考.方法: 运用偏小二乘法判别分析(PLS-DA) 对已建立的二神丸提取物指纹图谱建立PLS-DA 模型,并利用高效液相色谱(HPLC) 对指标成分进行定性鉴定和定量测定.结果: 建立的PLS-DA 模型可靠,预测能力良好.统计结果显示补骨脂炮制前、后分别组成二神丸的石油醚提取物可明显区分,并揭示了对此区分贡献大的16 个潜在标志性色谱峰,结合标准物质定性鉴定了6 个色谱峰,其中4个为贡献大的潜在标志性指标成分.同时测定了该6 个指标成分在10 批炮制前和10 批炮制后提取物的含量,其中补骨脂素、异补骨脂素、甲基丁香酚和甲基异丁香酚炮制后含量升高,去氢二异丁香酚和补骨脂酚炮制后含量降低.结论: 该方法从定性和定量两方面控制炮制前、后二神丸提取物的内在质量,更全面地反映了二神丸提取物的化学成分信息及炮制前后的差异性,为提取物质量评价和控制提供了一个有效的参考.
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深加工对补骨脂浸出物及其补骨脂素、异补骨脂素含量的影响
目的:改进补骨脂加工炮制方法.方法:将补骨脂用自制轧药机轧扁至裂开,与未轧的药材分别加水或乙醇提取,以水或醇溶性浸出物量及其补骨脂素、异补骨脂素含量为考察指标,用高效液相色谱法测定,条件为:Supelco ODS C18柱,柱温30℃,流动相为甲醇-水(43:57),检测波长为246 nm.结果:在相同条件下,补骨脂轧扁样品的水或醇溶性浸出物量及其补骨脂素、异补骨脂索含量均比未轧的整粒高,其中,水溶性浸出物增加了0.61倍,醇溶性浸出物增加了1.53倍,水溶性及醇溶性浸出物中补骨脂素、异补骨脂素含量均增加了1.22倍,两者得率悬殊,差异显著.结论:补骨脂经轧扁法加工后能显著提高浸出物量及其有效成分的提取率,增进临床疗效,方法合理,值得推广.
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补骨脂炮制前后化学成分的变化
目的:从炮制前后补骨脂素、异补骨脂素和微量元素含量的变化探讨补骨脂炮制的物质基础.方法:采用HPLC梯度洗脱法、电感藕合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)分别测定了补骨脂炮制前后的补骨脂素、异补骨脂素及六种微量元素的含量.结果:炮制使补骨脂中的微量元素Mn、Ca、Mg、Fe、Zn含量增加,但Cu含量变化不明显;补骨脂素、异补骨脂素含量增加.结论:炮制使补骨脂有效成分含量增加,提高了中药补骨脂整体生物活性.
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30%补骨脂酊联合窄波紫外光照射治疗糖尿病性成人硬肿病1例
目的:探讨30%补骨脂酊联合窄波紫外光照射治疗糖尿病性成人硬肿病的临床疗效.方法:将30%补骨脂酊外搽患处,1小时后加窄波紫外光(NB-UVB)照射,每周3次.结果:该患者照射6次后病情有明显改变,且不影响糖尿病治疗.结论:PUVB法对病程迁延的糖尿病性成人硬肿病是一种较好的治疗方法.
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补骨脂雌激素样作用的有效成分研究
目的 筛选中药补骨脂类雌激素样作用的有效成分.方法 采用系统溶剂法对补骨脂药材进行分段制样,通过小鼠子宫增重法筛选出活性部位;对石油醚部位进行硅胶柱色谱分离,通过小鼠子宫增重法筛选出有效成分.结果 补骨脂石油醚提取部位高剂量组(5 g/kg)能显著增加子宫重量和子宫系数,与正常对照组相比有显著性差异(P＜0.01),具有较强的类雌激素样作用;从补骨脂石油醚提取部位分离得到的化合物补骨脂酚具有显著的雌激素样活性(P＜0.01).结论 补骨脂酚为中药补骨脂雌激素样作用的有效成分之一.
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补骨脂提取物对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的影响
目的 观察补骨脂提取物对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化的影响.方法 在新生大鼠颅骨成骨细胞体系中加入不同浓度的补骨脂提取物,检测细胞内碱性磷酸酶(ALP)含量,并用MTT法检测细胞增殖.结果 补骨脂乙酸乙酯提取物和乙醇提取物能促进大鼠颅骨成骨细胞ALP活性及其增殖,佳浓度为2.0×10-3 mg/mL.结论 补骨脂乙酸乙酯提取物和乙醇提取物均可促进成骨细胞分化、增殖.
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补骨脂药材不同有效部位中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定
目的 建立高效液相色谱测定补骨脂不同有效部位中补骨脂素和异补骨脂素含量的方法. 方法 高效液相色谱法.Kromasil RP-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-水(65:35);流速:1.0mL·min-1;检测波长:245 nm. 结果 补骨脂素进样量在10.5 ng～525 ng,异补骨脂素进样量在9 ng～450ng内线性关系良好;相关系数:补骨脂素r=0.999 3,异补骨脂素r=0.999 9.不同有效部位中补骨脂素和异补骨脂素的含量有差别,其中乙酸乙酯部位(C)中含量高,正丁醇部位(D)和水部位上清液(E)中含量很低. 结论 该法操作简便,结果准确,重现性好.
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顽痹乐丸的质量标准研究
目的建立顽痹乐丸的质量控制标准.方法采用TLC法对补骨脂、葛根、白芍、炙甘草进行定性鉴别;采用薄层扫描法对补骨脂中异补骨脂素进行含量测定,层析板:高效硅胶G板,展开剂:正己烷-醋酸乙酯(8:2),采用反射法单波长锯齿扫描,光束狭缝:0.4×0.4 mm,线性参数SX=3,扫描波长300 nm.结果鉴别项下阴性对照无干扰,专属性强;异补骨脂素在0.064～1.536 μg间呈良好的线性关系,r=0.9980,平均回收率为100.7%,RSD为2.0%.结论该方法可用作顽痹乐丸的质量控制方法.
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补骨脂中补骨脂素的提取及纯化
目的从中药材补骨脂中提取补骨脂素.方法补骨脂经粉碎后用50%乙醇浸渍提取,浸提液进行浓缩沉淀,得到膏状物,膏状物用甲醇溶解,活性碳脱杂质,再除去溶剂,放置过夜析出晶体.甲醇洗去稠状物得黄色片状晶体,甲醇重结晶后得针状白色晶体.薄层分析、高效液相色谱分析其纯度.紫外吸收光谱、H1-NMR谱鉴定其结构.结果与结论 晶体物得率0.147%,是一个单体,经过波谱分析确定其为补骨脂素.用本方法获取纯品补骨脂素比较简便的方法.
关键词： 补骨脂 补骨脂素/分离和提纯 -
补骨脂素脂质体凝胶体外释药模式的考察
目的制备治疗白癜风的补骨脂素脂质体凝胶,对其体外释药模式进行定量考察.方法以同浓度的补骨脂素凝胶为对照,用透析法检测补骨脂素脂质体凝胶的体外释药模式,并对其在4 ℃下贮存3周的释药稳定性进行研究.结果与补骨脂素凝胶比较,补骨脂素脂质体凝胶具有明显的缓释及长效作用,且前3 h释药符合Higuchi扩散模式(k=4.67%h-1/2),3 h后遵循零级释药模式(k=0.74%h-1).而补骨脂素凝胶在实验的24 h内释药均符合Higuchi扩散模式(k=7.18%h-1/2).在贮存期内,补骨脂素脂质体凝胶的释药模式及包封率均维持稳定.结论补骨脂素脂质体凝胶体外释药具有明显的缓释特征,稳定性理想,值得进一步研发.
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盐蒸法炮制补骨脂的合理性
为探讨盐蒸法炮制补骨脂的合理性,采用高效液相色谱法(HPLC)测定了盐炙品、盐蒸品水提和醇提液中补骨脂素和异补骨脂素的含量.结果:水提和醇提液中有效成份的含量均为盐蒸大于盐炙.表明盐蒸法炮制补骨脂是合理可取的.
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四神丸新用
四神丸乃出之明王肯堂<证治准绳>.由补骨脂、肉豆蔻、吴茱黄、生姜、大枣组成.后世医家多以汤剂使用.本方以治脾肾阳虚之五更泄泻著称,余于临床加减化裁,用治多种疾病,每获良效,现举数例.
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高效液相色谱法测定补骨脂中补骨脂酚的含量
目的 建立用高效液相色谱法测定补骨脂中补骨脂酚含量的模式.方法 采用高效液相色谱法,依利特色谱柱(Hypersil ODS2 4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-水梯度洗脱,在检测波长260 nm,测定了补骨脂酚的含量.结果 补骨脂酚在0.004 312～0.043 12 mg·mL-1的范围内呈现出良好的线性关系(r=0.999 9),该方法平均回收率为99.6％,RSD 1.2％.结论 本方法简单、稳定、准确、重复性好,可用于测定补骨脂中补骨脂酚的含量.
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补骨脂单味应用和复方应用对大鼠肝脏毒性的比较
目的:观察口服不同剂量的单味补骨脂水提液及补骨脂复方水提液对实验大鼠肝脏的影响.方法:将10月龄SD大鼠采用去卵巢术造模后,随机分成术后灌服补骨脂高剂量水提液组、灌服补骨脂低剂量水提液组、灌服补骨脂复方水提液组和灌服冷开水组(空白对照组).术后第12周处死大鼠,各组随机取4只大鼠的肝脏送检,HE染色,显微镜下观察和比较各组组织学的变化.结果:高剂量水提液组大鼠组织学观察可见部分区域的肝细胞出现混浊肿胀和脂肪变性,个别区域可见部分肝细胞坏死.其余三组大鼠肝细胞未见异常改变.结论:服用较高剂量的补骨脂水提液可对实验大鼠的肝细胞造成一定程度损伤,而等剂量补骨脂在复方中与其它中药配伍合煎后的水提液,未见对肝脏造成明显的影响,其机理尚有待进一步研究阐明.
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杜仲补骨脂促进离体培养成骨细胞增殖的实验研究
目的:研究杜仲和补骨脂处理对离体培养成骨细胞增殖的影响.方法:取1日龄的SD大鼠、分离培养露骨中的成骨细胞并分为4组,A组用不含药物及血清的DMEM处理,B组用杜仲终浓度为10 μg/L的无血清DMEM处理,C组用补骨脂终浓度为10 μmol/L的无血清DMEM处理,D组用杜仲终浓度为10 μg/L及补骨脂终浓度为10 μmol/L的无血清DMEM处理.处理后24小时,检测细胞中凋亡基因和增殖基因的mRNA表达量.结果:B组、C组、D组细胞中Bax、Fas、FasL、HSG的mRNA表达量均显著低于A组,c-fos、c-jun、CyclinD1、Egr-1、NDRG1的mRNA表达量均显著高于A组;D组细胞中Bax、Fas、FasL、HSG的mRNA表达量均显著低于B组和C组,c-fos、c-jun、CyclinD1、Egr-1、NDRG1的mRNA表达量均显著高于B组和C组.结论:杜仲和补骨脂能够促进成骨细胞的增殖且两药联用具有协同作用.
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不同来源、不同炮制方法的补骨脂对成骨细胞SaOS-2骨形成功能的影响
目的 研究不同来源、不同炮制方法的补骨脂对成骨细胞SaOS-2骨形成功能的影响.方法 实验分为补骨脂给药组和对照组,体外培养SaOS-2细胞,给药组分别给予不同批次、不同炮制方法的补骨脂(100 mg/L),四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测成骨细胞的增殖;PNPP法测定碱性磷酸酶(ALP)活性;酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测成骨细胞骨钙素(OTC)及Ca2+含量;茜素红染色法检测细胞矿化结节数.结果 与对照组比较,不同来源的补骨脂均能显著促进SaOS-2细胞增殖、分化及矿化,差异均有统计学意义(P<0.05);酒制补骨脂、清炒补骨脂、雷公补骨脂、盐炙补骨脂及补骨脂生品各组的细胞增殖率依次为(118.01±0.38)％、(118.00±0.76)％、(121.01±0.88)％、(120.21±0.78)％、(117.21±0.78)％,ALP活性分别为(909.52±33.44)U/g、(915.45±23.04)U/g、(927.89±23.29)U/g、(938.52±23.94)U/g、(900.52±23.94)U/g,Ca2+的分泌分别为(182.79±5.72)mg/L、(183.74±6.01)mg/L、(185.89±7.23)mg/L、(187.79±6.01)mg/L、(180.79±6.01)mg/L,OTC的分泌分别为(15.41±0.77)μg/L、(15.42±0.56)μg/L、(15.40±0.68)μg/L、(15.58±0.68)μg/L、(15.41±0.68)μg/L,细胞矿化结节数依次为(10.52±0.77)个、(10.55±0.65)个、(10.59±0.47)个、(10.74±0.77)个、(10.50±0.77)个,以上各指标与对照组[(100.00±0.53)％、(411.62±15.46)U/g、(25.25±1.47)mg/L、(11.41±0.63)μg/L、(4.20±0.60)个]相比,差异均有统计学意义(P<0.05).雷公补骨脂和盐炙补骨脂的细胞增殖率分别为(121.01±0.88)％、(120.21±0.78)％,明显高于补骨脂生品的(117.21±0.78)％,差异均有显著统计学意义(P<0.01);盐炙补骨脂与补骨脂生品的ALP活性[(938.52±23.94)U/g vs(900.52±23.94)U/g]相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 补骨脂药材的来源对其促成骨细胞骨形成的作用无明显影响;补骨脂药材经炮制后促进成骨细胞骨形成的作用较生品更优.
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补骨脂对乳腺癌骨痛大鼠痛行为及肿瘤生长的影响
目的 研究补骨脂对大鼠乳腺癌骨痛模型痛行为、骨破坏及肿瘤生长情况的影响.方法 将大鼠乳腺癌细胞MRMT-1株接种在雌性SD大鼠左侧胫骨骨髓腔内制成乳腺癌骨痛模型,观察补骨脂(水煎剂,造模次日开始给药,剂量为生药0.5g·100g体重-1·d-1)的作用,以唑来膦酸作为阳性对照药.造模20d后观察Von Frey纤维刺激的50%缩足阈(50%PWT)、双足负重差异;第21日取材,测定子宫系数和肿瘤体积;用左胫骨放射评分、骨密度(BMD)和骨矿物质含量(BMC)评价骨破坏程度.结果 补骨脂可使乳腺癌骨转移大鼠50%PWT提高,双足负重差异下降,肿瘤体积减小,放射评分减低,BMD和BMC升高.结论 补肾壮骨中药补骨脂在大鼠乳腺癌骨痛模型上能减轻癌性疼痛,其机制可能与抑制肿瘤生长、减轻骨破坏有关.
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补骨脂对小鼠免疫功能的影响
目的:考察补骨脂对小鼠体液免疫功能的影响.方法:小鼠灌胃给药7 d后,分别用凝集反应及酶标法测定免疫小鼠给药后产生特异性抗体的水平.结果:与对照组比较,实验组抗体滴度及OD值均显著提高.结论:补骨脂对特异性体液免疫具有增强功能.
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四肢外洗颗粒的质量标准研究
目的:建立四肢外洗颗粒的质量标准.方法:采用薄层色谱(TLC)法对制剂中当归、独活和补骨脂进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定制剂中蛇床子素的含量.结果:当归、独活的TLC斑点清晰、分离度好,阴性对照无干扰；但补骨脂色谱无特征斑点.蛇床子素检测浓度在7.80～175.50μg· mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.999 2)；平均回收率为98.21％,RSD=1.42％ (n=6).结论:所建标准可用于四肢外洗颗粒的质量控制；鉴于补骨脂TLC无特征斑点,需进一步进行研究.
