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清脑宣窍方有效组分对缺血性脑中风大鼠血脑屏障上P-糖蛋白表达的影响
目的 比较正常及缺血损伤时大鼠血脑屏障上转运蛋白中P-糖蛋白(P-gp)时征表达及清脑宣窍方有效组分对其表达的影响.方法 线栓法制备缺血性脑中风大鼠模型,按照不同再灌注时间,模型组再分为0、0.5、1、2、6、12、24 h,采用免疫组织化学法观察正常组与模型组大鼠脑皮质及海马缺血区P-gp的表达.除假手术组外,缺血动物于术后1d,随机分为模型组、清脑宣窍方有效组分高、中、低剂量组、维拉帕米组,并于造模后1～5 d灌胃给予相应药物.末次给药后,处死动物,取材,检测大鼠脑皮质及海马区P-gp的表达.结果 免疫组织化学染色结果显示,正常组与模型组大鼠脑皮质及海马缺血区均可见P-gp阳性染色.免疫组化半定量分析表明,与正常组比较,不同再灌注时间模型组P-gp表达量均有显著性差异(P＜0.05),皮质及海马缺血区P-gp表达量均降低；与模型组比较,清脑宣窍方有效组分各剂量组及维拉帕米组对缺血性脑中风大鼠脑皮质及海马区P-gp表达量明显降低(P＜0.05).结论 在缺血性脑中风病理状态下,大鼠脑血脑屏障上转运蛋白P-gp存在一定的时征表达,而且从一定程度上反映了特定病理状态下由于蛋白表达的改变而引起的血脑屏障通透性的变化.清脑宣窍方有效组分对缺血性脑中风大鼠脑皮质及海马缺血区P-gp表达具有显著的抑制作用.
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RP-HPLC法测定清脑宣窍方有效部位中人参皂苷Rg1及Rb1含量
目的建立清脑宣窍方有效部位中人参皂苷Rg1、Rb1 HPLC 含量测定方法.方法采用YWG-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,10 μm),检测波长:203 nm.人参皂苷Rg1的流动相为乙腈-0.05 %磷酸水(21:79),流速:1.2 mL/min,人参皂苷Rb1的流动相为乙腈-0.05 %磷酸水(31:69),流速:0.9 mL/min.结果该法人参皂苷Rg1平均回收率为100.71 %,RSD=1.16 %(n=5).人参皂苷Rb1的平均回收率为99.32 %,RSD=2.52 %(n=5).结论本法操作简便、准确,可作为清脑宣窍方有效部位的质量控制方法之一.
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清脑宣窍方有效部位的化学成分研究(Ⅱ)
目的 对清脑宣窍方有效部位化学成分进行系统研究.方法 大孔树脂、聚酰胺、硅胶等色谱方法分离,波谱法鉴定结构.结果 从清脑宣窍方有效部位中分离得到12个化合物,分别为20(S)-原人参三醇(Ⅰ),人参皂苷Rd(Ⅱ),三七皂苷R4(Ⅲ),2α,3β,19α,23-四羟基齐墩果-12-烯-28-酸(Ⅳ),6″-香豆酰龙胆双糖苷(Ⅴ), Galioside(Ⅵ),6α-Hydroxygeniposide(Ⅶ),槲皮素(Ⅷ),3,3',5,5'-四甲氧基-4,4'-二-β-D-葡萄糖双环氧木脂素(Ⅸ),藏红花酸(Ⅹ),豆甾醇(Ⅺ)和β-谷甾醇(Ⅻ).结论 均为首次从清脑宣窍方有效部位中分离得到的已知化合物.
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清脑宣窍方有效部位的化学成分研究(Ⅰ)
目的对清脑宣窍方中有效部位化学成分进行系统研究.方法大孔树脂、聚酰胺、硅胶等层析方法分离,波谱法鉴定结构.结果从清脑宣窍方有效部位中分离得到9个化合物,分别为:①熊果酸,②人参皂苷Rg1,③人参皂苷Rh1(R),④人参皂苷Rh1(S),⑤人参皂苷Re,⑥人参皂苷Rb1,⑦栀子苷,⑧三七皂苷R1,⑨Genipin-1-O-β-gentiobioside.结论以上9个化合物均为首次从复方清脑宣窍方中分离得到的已知化合物.
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RP-HPLC法测定Beagle犬血浆中清脑宣窍方有效部位4种主要成分的血药浓度
目的 建立血浆中清脑宣窍方有效部位中栀子苷、人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1的HPLC血药浓度测定方法.方法 血浆样品用C18固相柱萃取,以亥茅酚苷为内标,选用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-水二元梯度洗脱,柱温为30℃;流速为1.0 mL/min;检测波长为203 nm.结果 各成分的低检测浓度(S/N＞3)在0.2～0.9 mg/L之间,平均回收率均在90%以上,日内、日间精密度及稳定性的RSD均小于10%.结论 该方法简便、准确,可作为清脑宣窍方血药浓度定量分析方法.
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HPLC法测定清脑宣窍方有效部位中人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1的含量
目的 建立清脑宣窍方有效部位中人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1的HPLC含量测定方法.方法 采用Phenomenex Luna NH2色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(80∶20),流速为1.0 mL/min,检测波长为203 am.结果 人参皂苷Rg1平均回收率为101.86%,RSD为1.68%(n=9);三七皂苷R1平均回收率为101.23%,RSD为1.28%(n=9);人参皂苷Rb1平均回收率为102.02%,RSD为1.45%(n=9).结论 该方法简便、准确,可用于清脑宣窍方有效部位中人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R13种成分的含量测定.
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HPLC法同时测定大鼠心脏中清脑宣窍方三种成分栀子苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量
目的 建立大鼠心脏中清脑宣窍方有效部位中栀子苷、人参皂苷Rg1、Rb1的HPLC浓度测定方法.方法 内脏样品匀浆、甲醇提取、离心后水溶,用C18固相柱萃取,以亥茅酚苷为内标,选用色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),Eclipse XDB-C18保护柱.流动相为乙腈-酸水二元梯度洗脱,柱温为30℃,流速为1.0 mL/min,检测波长为203 nm.结果 各成分的低检测浓度(S/N>3)在0.16～1.1 ms/L之间,平均回收率均在90%以上,日内、日间精密度及稳定性的RSD均小于10%.结论 该方法简便、准确,可用于心脏组织中清脑宣窍方有效部位栀子苷、人参皂苷Rg1、Rb1三种成分定量分析.
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RP-HPLC法测定清脑宣窍方有效部位中藏红花酸含量
目的建立清脑宣窍方有效部位中藏红花酸的含量测定方法.方法采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定藏红花酸含量,运用YWG-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,10 μm),流动相为甲醇-水-冰乙酸,流速:1 mL/min,检测波长:423 nm.结果藏红花酸在0.022～0.110 μg范围内与其色谱峰面积呈良好的线性关系,r=0.9991,平均回收率为99.4%,RSD=1.90%(n=5).结论本法操作简便、准确,可作为清脑宣窍方有效部位的质量控制方法之一.
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不同模型下清脑宣窍方有效组分药代动力学研究
目的 研究清脑宣窍方有效组分栀子苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1在正常、脑中风急性期和恢复期状态下大鼠体内的药代动力学变化.方法 按双侧颈动脉结扎并喂养2周制备中风恢复期模型,采用MCAO法制备中风急性期模型.灌服给予清脑宣窍方有效组分,血浆样品用C18固相柱萃取,以亥茅酚苷为内标,选用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-水二元梯度洗脱,柱温为30℃;流速为1.0 Ml/min;检测波长为203 nm.采用DAS1.0软件对各血浆药物浓度进行拟和分析.结果栀子苷、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1在大鼠体内药动学过程均属于二室模型,人参皂苷Rb1属于一室模型.各组分高血药浓度(Cmax)、血药浓度时间曲线下面积(AUC)值均表现为急性模型组>恢复模型组>正常组.结论 不同模型下动物对清脑宣窍方有效组分吸收不同,同等剂量下生物利用度顺序为急性模型组>恢复模型组>正常组.
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清脑宣窍方有效部位的两个新化合物研究
目的 研究清脑宣窍方有效部位的化学成分.方法 大孔树脂、硅胶、聚酰胺等色谱方法分离,波谱法鉴定结构.结果 从清脑宣窍方有效部位中分离得到两个化合物,其化学结构分别鉴定为达玛-24(25)-烯-3β,12β,20(S)-三醇-6-O-(6-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖)-20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅰ)、2,6,11,15-四甲基-2,4,6,8,10,12,14-十六烯单乙酯(Ⅱ).结论 两个化合物均为新化合物,分别命名为三七皂苷Rt(Ⅰ)和藏红花酸单乙酯(Ⅱ).
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大鼠脑中清脑宣窍方栀子苷等3个指标性成分的高效液相色谱分析
目的 建立大鼠脑中清脑宣窍方有效部位中3个指标性成分栀子苷、人参皂苷Rg1、Rb1的HPLC浓度测定方法.方法 大鼠脑样品取出,洗去残血、匀浆、甲醇提取、离心后水溶,用C18固相萃取柱处理,以亥茅酚苷为内标,选用色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),Eclipse XDB-C18保护柱.流动相为乙腈-甲酸水二元梯度洗脱,柱温为30℃,流速为1.0 ml/min,检测波长为203 nm.结果 各成分的低检测限(S/N＞3)在0.16～1.1 mg/L之间,平均回收率均在90%以上,日内、日间精密度及稳定性的RSD均小于10%.结论 该方法简便、准确,可用于脑组织中清脑宣窍方有效部位栀子苷、人参皂苷Rg1、Rb1 3种成分定量分析.
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口服清脑宣窍方后大鼠脑部化学成分研究
目的 研究大鼠口服清脑宣窍方有效部位后进入脑组织的清脑宣窍方移行成分.方法 大鼠脑样品取出,洗去残血、匀浆、甲醇提取、离心后水溶,用C_(18)固相萃取柱处理,选用色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5 μm),Eclipse XDB-C_(18)保护柱.建立大鼠口服清脑宣窍方有效部位后脑组织的LC-MS指纹图谱,并结合前期已分得的单体,对脑组织中移行成分进行了指认.结果 确定了清脑宣窍方有效部位的靶器官脑的18个移行成分.结论 清脑宣窍方栀子与三七的指标性有效成分栀子苷、人参皂苷Rg_1、人参皂苷Rb_1均能进入脑,发挥作用.
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清脑宣窍有效组分在正常及不同模型大鼠体内的心脏药动学
目的:研究口服清脑宣窍方后在正常、脑中风急性期模型和恢复期模型下大鼠心脏药动学的变化.方法:按双侧颈动脉结扎并喂养2周作为恢复期模型,采用MCAO法制备急性期模型为模型组实验对象.口服给与清脑宣窍方有效组分6 g·kg-1,各时间点取出心脏,洗去残血、匀浆、甲醇提取、离心后水溶,C18固相柱萃取,以亥茅酚苷为内标,用高效液相色谱法,选定203 nm作为检测波长.同时测定有效组分栀子苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的浓度,并采用DAS 1.0软件对各心脏药物浓度进行拟合分析.结果:栀子苷、人参皂苷Rg1在大鼠心脏内药动学过程均符合二室模型,人参皂苷Rb1符合一室模型.各物质Cmax、AUC值均表现为急性模型组>恢复模型组>正常组.结论:在选定的高效液相色谱条件下,3个有效组分,内标及心脏杂质分离良好,可用于3种成分的心脏组织含量测定.模型状态下的动物与正常状态下的动物,清脑宣窍有效组分的体内药动学过程有明显差异.
