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人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1基因低表达增加肺腺癌细胞对博来霉素的敏感性
目的 研究DNA碱基切除修复基因人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶 1(hOGG1)低表达增加肺腺癌细胞对博来霉素(BLM)的敏感性的作用,为化疗增敏提供更多的实验依据.方法 以肺腺癌A549细胞和通过稳定转染hOGG1核酶而获得的hOGG1低表达的A549-R细胞为研究对象,用MTT试验和集落形成抑制试验测定不同浓度BLM处理后两种细胞的存活率和形成集落的能力;体外微核试验及单细胞凝胶电泳检测两种细胞微核率及DNA损伤与修复的差异.结果 BLM作用下A549-R细胞的IC50及集落形成率显著低于A549细胞;BLM可诱导两种细胞的微核率增高,而在相同浓度下A549-R细胞微核率较A549细胞更高;单细胞凝胶电泳结果显示,BLM作用下两种细胞均有不同程度DNA损伤,A549-R细胞的拖尾率和DNA迁移长度显著大于A549细胞;损伤后A549细胞修复发生较A549-R早,与A549细胞相比A549-R细胞更不易修复.结论 hOGG1低表达使肺腺癌细胞DNA修复能力降低,从而使其对BLM的敏感性增强.
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hOGG1重组腺病毒载体在人视网膜色素上皮细胞的表达及其抗氧化应激作用研究
目的：观察重组腺病毒pAd-CMV5-DEST-hogg1转染人视网膜色素上皮细胞ARPE-19后，高表达hOGG1对视网膜色素上皮细胞在H2 O2诱导的氧化损伤中的作用。方法：鉴定和包装重组腺病毒pAd-CMV5-DEST-hogg1和腺病毒载体对照pAd／CMV／V5-GW／lacZ，并分别转染ARPE-19细胞。 H2 O2（100μmol· L－1，2 h）干预转染重组腺病毒的ARPE-19细胞（RPE-Ad-hogg1）、转染腺病毒载体对照的ARPE-19细胞（RPE-Ad-lacZ）以及未转染病毒的ARPE-19细胞。蛋白免疫印迹法检测3组细胞hOGG1的表达量；流式细胞仪检测细胞内ROS的生成量；免疫细胞化学方法检测氧化损伤标志性终产物8-羟基鸟嘌呤（8-oxodG）的形成量。结果：重组腺病毒pAd-CMV5-DEST-hogg1包装成功，并在ARPE-19细胞中表达；高表达hOGG1的视网膜色素上皮细胞较两对照组细胞显示出更少的ROS生成量（ P＜0.05）、更低的8-oxodG氧化损伤程度（ P＜0.01）。结论：视网膜色素上皮细胞hOGGl蛋白高表达，可提高ARPE-19细胞碱基水平的修复能力。
