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多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶及其抑制剂与炎症治疗的研究进展
多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PA RP)是近年发现的治疗炎性疾病的一个新靶点,其过度活化能在基因水平调节炎症相关因子,如核因子-κB、诱导型一氧化氮合酶、激活蛋白-1、热休克蛋白1等的表达,从而导致细胞变性坏死,引起炎症反应.因此PARP被认为是炎性疾病发病的诱因之一,抑制PARP的活性将为治疗炎性疾病带来新的希望.本文就PARP的蛋白结构和功能及其在炎症中的作用机制,以及PARP抑制剂在炎性疾病治疗中的应用研究作一综述.
关键词： 多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶 抑制剂 炎症 -
风药、补虚药对脑缺血大鼠Caspase-3和PARP表达的影响
目的 观察侯氏黑散方中的风药、补虚药对凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)及DNA修复蛋白多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)在缺血脑组织表达的影响.方法 线栓法制备大脑中动脉栓塞(MACO)模型,缺血动物于术后随机分成模型组、风药组、补虚药组、风药补虚药联用组.分别在术后6、24、48 h3个时间点取材,运用免疫组织化学方法结合图像分析技术,检测大鼠缺血侧海马CA1区、顶叶皮层、纹状体凋亡蛋白Caspase-3及DNA修复蛋白PARP的表达.结果 缺血6h,风药可降低海马CAI区、顶叶皮层凋亡蛋白Caspase-3的表达,下调纹状体PARP的表达；补虚药可上调大鼠海马CAI区、顶叶皮层、纹状体PARP的表达.缺血24 h,风药可明显降低海马CAI区、顶叶皮层Caspase-3的表达.缺血48 h,风药可明显降低顶叶皮层、纹状体凋亡蛋白Caspase-3的表达,下调纹状体PARP的表达,补虚药可明显上调纹状体PARP的表达.结论 侯氏黑散方中风药主要通过不同时间、不同部位选择性下调Caspase-3的表达而补虚药则主要通过上调DNA修复蛋白PARP的表达,促进脑细胞的自我修复功能以防止脑细胞凋亡的发生.
关键词： 脑缺血 风药 补虚药 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶 大鼠 -
多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶及其抑制剂在创伤性脑损伤治疗方面的研究进展
多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶( poly ADP-ribose polymerase,PARP)在DNA损伤修复、维持基因组稳定性方面起着重要作用。笔者对PARP的结构和生物学功能进行简要介绍,归纳近几年PARP抑制剂在创伤性脑损伤方面的研究成果,并提出临床策略中可能存在的问题以及未来发展方向。
关键词： 多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶 炎症 创伤性脑损伤 -
多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶抑制剂AG014699联合化疗对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响
目的 研究多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)抑制剂AG014699联合多西他赛(DTX)或卡铂(CBP)对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响,探讨PARP抑制剂AG014699联合化疗是否有协同抗肿瘤效应.方法 PARP抑制剂AG014699与DTX、CBP单独或联合作用于MDA-MB-231细胞,细胞增殖及细胞毒性实验法检测细胞增殖并用联合用药公式分析合用效应(q值0.85～1.15为单纯相加,＞1.15为协同,＜0.85为拮抗);流式细胞仪分析细胞凋亡及周期分布.结果 PARP抑制剂AG014699、DTX、CBP单独作用于MDA-MB-231细胞,均可抑制增殖,诱导凋亡,引起细胞周期阻滞;PARP抑制剂AG014699(10μmol/L)与DTX (10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L)、CBP (10-5、10-4 mol/L)联合作用时,q值在0.85 ～1.15,显示相加效应;PARP抑制剂AG014699与CBP (10-3 mol/L)联合作用时,q值＞1.15,显示协同效应.PARP抑制剂AG014699联合DTX或CBP能进一步促进凋亡,并使G2/M期细胞比例增加.结论 PARP抑制剂AG014699联合化疗药物DTX或CBP能显著抑制MDA-MB-231细胞增殖,发挥相加或协同抗肿瘤作用.
关键词： 三阴性乳腺癌 多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶 多西他赛 卡铂 -
茯苓酸通过激活多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡
目的 观察茯苓酸对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨作用机制.方法 乳腺癌MDA-MB-231细胞与不同浓度(1、2、5μrnol/L)的茯苓酸共孵育,采用CCK-8细胞增殖与活性检测试剂盒检测细胞存活率;流式细胞术Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡;Western blotting法检测多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)及与细胞凋亡相关蛋白的表达.结果 茯苓酸能够剂量和时间依赖性地抑制MDA-MB-231细胞的增殖,并可诱导MDA-MB-231细胞凋亡.浓度为1、2、5 μmol/L的茯苓酸作用MDA-MB-231细胞48 h后,细胞凋亡率显著增加至25.6％、59.4％、87.2％,明显高于对照组凋亡率(5.4％);经过1、2、5 μmol/L茯苓酸分别处理48 h后,实验组MDA-MB-231细胞中凋亡蛋白标志物PARP裂解量升高,且呈剂量依赖性.结论 茯苓酸能抑制MDA-MB-231细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制与激活PARP有关.
关键词： 茯苓酸 乳腺癌 MDA-MB-231细胞 增殖 凋亡 多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶 -
子痫前期血浆多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶及脂蛋白相关磷脂酶A2活性变化研究
目的 探讨多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)及脂蛋白相关磷脂酶A2 (Lp-PLA2)在子痫前期发病中可能的致病机制.方法 选择2013年9月至2014年5月在中国医科大学附属盛京医院行剖宫产终止妊娠的妊娠晚期女性60例,根据是否存在子痫前期,将研究对象分为:子痫前期组32例(A组)以及正常孕妇组28例(B组).采集孕妇肘前静脉血浆2 mL并应用酶联免疫分析法进行PARP及Lp-PLA2活性测量.结果 A组PARP、Lp-PLA2活性表达均显著高于B组(P＜0.01).PARP与Lp-PLA2活性呈正相关(r=0.234,P＜0.01).PARP活性与新生儿1min Apgar评分、新生儿5 min Apgar评分存在相关性(r值分别为-0.243、-0.318,均P＜0.05).Lp-PLA2活性与孕妇收缩压、舒张压、脉压差、平均动脉压及新生儿5 min Apgar评分存在相关性(r值分别为0.342、0.335、0.245、0.351、-0.267,均P＜0.05).结论 子痫前期患者体内存在PARP、Lp-PLA2的高活性表达,血浆PARP、Lp-PLA2可能参与了子痫前期的致病过程,且PARP及Lp-PLA2的高活性有可能对新生儿不良妊娠结局有一定预测作用.
关键词： 多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶 脂蛋白相关磷脂酶A2 子痫前期 -
亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶表达的影响
目的 研究亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP-1)不同时空表达的影响,进一步探讨亚低温脑保护作用的分子机制.方法 线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,分假手术组、假手术+亚低温组、模型组及模型+亚低温组.应用Western blotting和免疫组化技术分别检测再灌注后不同时相缺血侧皮层PARP-1蛋白的表达与裂解.结果 模型组PARP-1蛋白表达量随再灌注时间的延长逐渐增加,至再灌注24h达高峰,然后逐渐减少,再灌注72h时仍高于假手术组的水平;模型组PARP-1蛋白出现裂解,随再灌注时间的延长,裂解逐渐增强.每一相同再灌注时间点,模型+亚低温组PARP-1蛋白表达量和裂解片段含量均低于模型组.结论 PARP-1的过度表达和裂解是局灶性脑缺血再灌注神经元死亡的重要分子机制.亚低温可通过抑制PARP-1的过度表达及减少PARP-1的裂解而发挥脑保护作用.
关键词： 亚低温 多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶 脑缺血 再灌注 -
PARP-1抑制剂对BRCA1基因沉默的乳腺癌细胞株MCF-7及PTEN基因沉默的前列腺癌细胞株22RV1增殖的影响
目的 探讨多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)抑制剂对被沉默人类乳腺癌易感基因(BRCA1)的乳腺癌细胞株MCF-7及被沉默张力蛋白同源10号染色体丢失的磷酸酶基因(PTEN)的前列腺癌细胞株22RV1的作用.方法 利用慢病毒介导的RNA干扰技术构建人乳腺癌MCF-7细胞的BRCA-1基因沉默细胞株及前列腺癌22RV1细胞的PTEN基因沉默细胞株.CCK-8法、流式细胞术分别检测PARP抑制剂AG014699对MCF-7、22RV1及转染细胞的增殖及周期分布的影响.Western blotting印迹法检测BRCA1、PTEN、DNA损伤修复酶RAD51、PARP、核因子κB(NF-κB)的蛋白表达.结果 被沉默BRCA1基因的MCF-7细胞株及被沉默PTEN基因的22RV1细胞不表达RAD51.PARP抑制剂可明显抑制BRCA1基因沉默的MCF-7细胞及PTEN基因沉默的22RV1细胞的增殖,呈浓度时间依赖性,可能与RAD51、NF-κB表达降低有关;PARP抑制剂使细胞周期阻滞于G2/M期.结论 PARP抑制剂能抑制存在DNA同源重组修复缺陷细胞(由BRCA1及PTEN功能异常所导致)的增殖,该作用可能与RAD51、NF-κB表达降低有关.
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臭氧氧化预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤后聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1/凋亡诱导因子通路的影响
目的 观察臭氧氧化预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)后聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)/凋亡诱导因子(AIF)通路的作用.方法 将30只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和臭氧氧化预处理组,每组10只,进行如下实验:(1)假手术组:切除大鼠右肾后缝合腹壁;(2)缺血再灌注组:切除右肾后,用无创伤血管夹夹闭左肾动、静脉45 min进行缺血,然后开放血管夹进行再灌注;(3)臭氧氧化预处理组:手术步骤与缺血再灌注组相同,但在术前15d内,每天对该组大鼠经直肠吹入氧气和臭氧的混合气体5.0 ～5.5ml[臭氧浓度为50 mg/L,1.0 mg/(kg·d)].全自动生化分析仪检测大鼠血清肌酐和尿素氮,观察大鼠肾组织的病理改变和细胞凋亡,免疫组织化学法检测PARP-1/AIF的表达,Western blot检测PARP-1、AIF的含量.结果 假手术组、缺血再灌注组和臭氧氧化预处理组的血清肌酐(μmol/L)和尿素氮(mmol/L)分别为19.34±2.27、130.18±23.48、70.91±15.69;7.52±1.98、28.81±10.62、16.54±6.18,苏木素-伊红(HE)染色可见臭氧氧化预处理可以明显减轻因缺血再灌注导致的肾小管上皮细胞变性坏死.与假手术组比较,缺血再灌注组和臭氧氧化预处理组PARP-1、AIF水平均显著升高,而臭氧氧化预处理组的上述指标又明显低于缺血再灌注组.假手术组、缺血再灌注组、臭氧氧化预处理组大鼠肾组织的细胞凋亡指数分别为(3.87±1.50)％、(32.45±4.70)％和(23.47±3.10)％,3组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 臭氧氧化预处理能减轻大鼠肾脏IRI损伤,其机制可能与臭氧氧化预处理抑制细胞凋亡通路PARP-1/AIF的表达有关.
关键词： 臭氧预处理 肾脏缺血 再灌注损伤 多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶 凋亡诱导因子 -
西洛他唑对大鼠脑缺血再灌注损伤后PARP/AIF介导的细胞凋亡途径的影响
目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和凋亡诱导因子(AIF)在海马CAI区的表达,探讨西洛他唑预处理能否通过PARP/AIF途径发挥脑保护作用. 方法 将135只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组、模型组、西洛他唑组,每组45只.采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注损伤模型.西洛他唑组造模前灌胃给予30 mg/kg剂量西洛他唑(2次).每组根据再灌注时间点不同(6 h、24 h、72 h)分为3个亚组,每亚组15只.应用TUNEL法检测神经细胞凋亡变化,Western blotting法检测AIF、腺苷二磷酸核糖(PAR)在不同时间点的变化,RT-PCR法检测AIF mRNA的表达变化. 结果 大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后出现AIF核移位.与假手术组比较,模型组凋亡细胞数明显增加,AIF、PAR含量及AIF mRNA表达明显增加,24 h时显著,差异均有统计学意义(P＜0.05).西洛他唑组再灌注6h、24 h、72 h各亚组凋亡细胞数较模型组中各亚组明显减少,AIF、PAR含量较模型组各亚组明显降低,AIF mRNA表达亦明显减少,24h时显著,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 西洛他唑对大鼠脑缺血再灌注损伤有一定保护作用,其抗神经细胞凋亡的机制之一可能是通过抑制脑缺血损伤引起的PARP的过度活化及AIF的易位而实现的.
关键词： 脑缺血再灌注 多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶 凋亡诱导因子 西洛他唑 细胞凋亡
