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结直肠癌中Kiss-1基因启动子甲基化与Kiss-1基因表达的关系
目的：研究结直肠癌中Kiss-1基因启动子甲基化状态对Kiss-1基因表达的影响。方法：应用甲基化特异性PCR （MSP）方法检测73例结直肠癌、正常结直肠组织和人结直肠癌细胞HCT116、SW480、W1116、LoVo中Kiss-1基因启动子甲基化状态，应用realtime-PCR、Western-blot技术检测相应组织和细胞中Kiss-1基因mRNA和蛋白质（Metastine）的表达量。结果：结直肠癌中Kiss-1基因甲基化阳性率（82.19%）高于正常组织（6.31%）（P<0.05）；结直肠癌组织中，甲基化阳性组Kiss-1基因mRNA和Metastine表达量均明显低于甲基化阴性组（P<0.05）。而HCT116、SW116和SW480细胞中Kiss-1基因启动子甲基化阳性，LoVo 细胞甲基化阴性；定量分析 Kiss-1基因 mRNA 和 matestin 表达量，结果显示 Lo-Vo>SW480>SW1116>HCT116，差异有统计学意义（p<0.05）。结论：结直肠癌中Kiss-1基因启动子甲基化可能引起Kiss-1基因表达下调。
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体外转染KISS-1基因对食管鳞癌细胞EC-1侵袭及增殖能力的影响
目的 观察KISS-1基因对食管鳞癌细胞EC-1侵袭及增殖能力的影响,探讨KISS-1基因与食管鳞癌生物学行为的关系.方法 检测KISS-1在EC-1、Eca109、EC9706和TE-1四种食管癌细胞株中的表达;利用脂质体介导在体外将KISS-1基因转染人食管鳞癌细胞EC-1,利用Western blot和RT-PCR方法检测转染之后KISS-1表达的改变,并采用Boyden小室体外侵袭实验及MTT、软琼脂克隆形成实验,观察KISS-1对食管鳞癌细胞侵袭及增殖能力的影响.结果 4种食管癌细胞株的Western blot和RT-PCR检测结果显示:EC-1中KISS-1蛋白(0.715±0.109)及mRNA(0.670±0.176)表达均低;转染之后Western blot和RT-PCR结果显示:KISSS-1蛋白和mRNA在转基因组的表达分别为1.143±0.218和0.877±0.162,均显著高于转空质粒组(0.745±0.130,0.685±0.128;t=3.850,2.481,P均<0.05)和对照组EC-1细胞(0.855±0.184,0.677±0.138;t=2.275,2.306,P均<0.05);Boyden小室检测细胞体外侵袭力实验发现转基因组在培养24、48和72 h后的穿膜细胞数分别为91.8±11.7,117.8±11.1和139.2±11.8,均显著低于转空质粒组(118.1±14.7,141.7±13.2,162.2±22.7;t=3.153,4.215,3.569,P值均<0.01)和对照组EC-1细胞(112.2±15.6,138.1±13.0,162.3±14.0;t=4.154,3.797,2.702,P值均<0.05).MTT检测结果显示,转基因组细胞在培养48 h和72 h后的增殖能力分别为0.517±0.127和0.394±0.137,与转空质粒组(0.636±0.186,0.513±0.150;t=2.054,2.709,P值均<0.05)和对照组(0.646±0.135,0.511±0.153;t=2.276,2.205,P值均<0.05)相比,细胞生长受到明显抑制;克隆形成实验结果显示,转基因组细胞的克隆形成数为157.2±36.4,明显低于转空质粒组(236.3±78.1;t=3.441,P<0.01)和对照组(242.5±48.6;t=2.250,P<0.05).结论 KISS-1基因在食管癌细胞株EC-1中可抑制细胞的体外侵袭能力及细胞的增殖能力.
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Kiss-1基因在乳腺肿瘤组织中的表达及其临床意义
目的 探讨Kiss-1 mRNA在乳腺肿瘤组织和正常腺体组织中的表达及其临床意义.方法 采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测70例乳腺癌、40例乳腺纤维腺瘤及肿瘤旁正常腺体中Kiss-1 mRNA的表达,采用配对t检验、成组t检验及方差分析比较各组间Kiss-1 mRNA的相对表达水平.结果 Kiss-1 mRNA在乳腺癌组织及纤维腺瘤组织中的表达量分别为(0.952±0.576)、(0.587±0.496),均高于正常腺体组织(t=7.917,P=0.00；t=2.656,P=0.011),乳腺癌组织中的表达量高于纤维腺瘤组织(t=3.365,P=0.001).有淋巴结转移的乳腺癌组织中Kiss-1 mRNA表达量为(0.662±0.530),低于无淋巴结转移乳腺癌组织(1.124+0.537)(t=3.495,P=0.001).结论 Kiss-1 mRNA在乳腺肿瘤组织中相对高表达,可能成为潜在的乳腺肿瘤标志物；Kiss-1 mRNA低表达可能与乳腺癌淋巴结转移相关.
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喉癌组织中Kiss-1基因蛋白表达的研究
目的 以喉鳞状细胞癌为研究对象,探讨Kiss-1基因蛋白表达在喉癌发生发展和转移中的作用及临床意义.方法 采用免疫组织化学SP法检测53例喉癌组织、24例癌旁组织及10例正常组织中Kiss-1基因蛋白的表达,分析在不同临床病理指标下Kiss-1蛋白表达的情况.结果 Kiss-1蛋白在正常组织中的阳性表达率(90.0%)及癌旁组织中的阳性率(79.2%)均显著高于癌组织中的阳性率(39.6%),差异有统计学意义(均P<0.01).癌组织中Kiss-1蛋白阳性表达率与临床分期和淋巴结转移有关,与病理分级无关.结论 喉癌的发生、发展和转移与Kiss-1基因的失活密切相关.
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Kisspeptin/GPR54系统与能量代谢的关系
营养状态和有效的能量储存可影响生育能力,但是连接能量代谢和生殖的细胞和分子机制还不十分清楚.研究表明,kisspeptin/G蛋白耦联受体(GPR)54系统是生殖系统的主要调控者,但近年的研究发现,能量平衡状态以及一些代谢因子能影响下丘脑KISS-1或GPR54的表达,从而影响下丘脑-垂体-性腺轴的功能.因此,下丘脑kisspeptin/GPR54系统可能在将机体能量代谢信息传递给调控生殖轴的中枢过程中有重要作用.
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KISS-1基因与肿瘤转移及其研究进展
肿瘤转移是恶性肿瘤重要的生物学特征之一,是危及肿瘤患者生命的主要原因.因此,如何控制肿瘤转移是决定恶性肿瘤患者预后的关键所在.肿瘤转移抑制基因在体内能直接抑制转移潜能并抑制肿瘤向第二位点扩散,故成为临床及基础研究的热点.KISS-1基因是近年新发现的一种肿瘤转移抑制基因,本文对该基因与肿瘤转移的研究进展综述如下.
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敲除鼻咽癌SU NE-1-6-10B细胞株中的K iSS-1基因对裸鼠肺转移的影响
目的:探讨在鼻咽癌细胞株SUNE-1-6-10B中敲除KiSS-1基因对于裸鼠肺转移能力的影响.方法:(1)应用CRISPR/Cas9技术敲除鼻咽癌细胞株SUNE-1-6-10B中的KiSS-1基因,采用Surveyor法和Western blot技术检测是否成功获得低表达KiSS-1基因的鼻咽癌细胞株.(2)将KiSS-1基因敲除的鼻咽癌细胞株和正常鼻咽癌细胞株(0.2 ml,5×106/ml)分别注入40只裸鼠腋下,各20只;25 d后,观察裸鼠肺转移灶的情况.结果:(1)利用CRISPR/Cas9技术成功敲除了SUNE-1-6-10B细胞株中的KiSS-1基因,并获得了能够稳定低表达KiSS-1基因的鼻咽癌细胞株.(2)25 d后,KiSS-1基因敲除组和KiSS-1基因未敲除组裸鼠腋下移植瘤的重量分别为(6.72±0.37)g和(6.80±0.38)g,差异无统计学意义(P>0.05);肺转移灶生成率分别为40％(8/20)和10％(2/20),差异有统计学意义(P<0.05).结论:CRISPR/Cas9技术能够敲除鼻咽癌细胞株SUNE-1-6-10B中的KiSS-1基因;KiSS-1基因对于鼻咽癌细胞肺转移具有一定的抑制作用.
关键词： 鼻咽癌 Kiss-1基因 基因敲除 CRISPR/Cas9 -
KISS-1基因在肾癌中的表达及对细胞侵袭力的影响
目的:检测肾癌原发灶和转移灶中KISS-1基因的表达并在体外实验中验证其缺失对细胞侵袭能力的影响.方法:选择30例肾癌患者,应用荧光定量PCR检测肾癌原发灶和转移灶中KISS-1基因mRNA的表达,应用RNA干扰技术获得KISS-1基因表达缺失的肾癌细胞株,检测干扰前后细胞的侵袭能力变化.结果:转移灶中的KISS-1 mRNA表达较原发灶中明显下调,KISS-1表达与肿瘤远处转移呈显著相关.干涉前后都有细胞穿透滤膜,干涉后细胞数明显高于干涉前,细胞数分别为31±6和78±8,两组有显著差异(P＜0.05).KISS-1基因表达缺失的肾癌细胞侵袭能力明显增强.结论:KISS-1基因在肾癌中具有转移抑制作用,可能在肾癌转移治疗中发挥作用.
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人KiSS-1基因克隆及其真核表达载体的构建
目的:克隆转移抑制基因KiSS-1的不含信号肽的表达序列,构建人KiSS-1基因的真核表达载体.方法:从人正常胰腺组织中提取总RNA,经RT-PCR得到KiSS-1基因开放阅读框cDNA序列,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3中,构建真核表达质粒pcDNA3/KiSS-1.结果:经PCR、酶切鉴定和基因序列测定,证实重组入载体pcDNA3的片段为目的基因开放阅读框的核苷酸序列.结论:重组质粒pcDNA3/KiSS-1的成功构建,为该基因相应蛋白质的表达和其抗体的制备研究提供基础.
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KISS-7基因与膀胱癌转移的相关性及其稳定表达对细胞侵袭能力影响
目的 探讨KISS-1基因与膀胱癌转移的相关性,及其稳定表达对膀胱癌细胞细胞侵袭能力的影响.方法 应用荧光定量PCR方法检测原发未转移膀胱癌和原发伴转移膀胱癌组织中KISS-1 mRNA的表达.构建真核表达载体pIRES2-KISS1,转染膀胱癌T24细胞系并筛选单克隆稳定转染细胞株,检测转染前后细胞的侵袭能力变化.结果 原发伴转移膀胱癌组织中的KISS-1 mRNA表达较原发未转移膀胱癌中明显下降,具有统计学差异(P＜0.05).单克隆稳定转染细胞系中KISS-1蛋白明显增加,细胞侵袭能力也随之明显降低(P＜0.05).结论 KISS-1基因与膀胱癌的转移相关,其表达增高能够抑制T24细胞的侵袭能力.
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KISS-1和MMP-9在裸鼠子宫内膜异位症模型中的表达及意义
目的:探讨KISS-1和基质金属蛋白酶9(MMP-9)在子宫不同生长阶段异位内膜组织中的表达及两者之间的相互作用.方法:将生育年龄妇女的分泌晚期子宫内膜组织种植入裸鼠的盆腹腔,建立裸鼠子宫内膜异位症(EM)模型.采用RT-PCR方法,检测不同生长阶段异位内膜中KISS-1 mRNA及MMP-9mRNA的表达相对强度.结果:KISS-1在5,10,15 d组和对照组比较,表达降低,差异显著(P＜0.05);30 d组与对照组比较,无显著性差异(P＞0.05).MMP-9在5,10,15,30 d组与对照组比较表达增强,差异显著(P＜0.05);且15 d组表达强,与5,10,30 d组比较差异显著(P＜0.05).KISS-1和MMP-9两者表达比较呈负相关(r=-0.575,P＜0.01).结论:KISS-1表达减弱和MMP-9表达增强可能与EM的侵袭过程有关,两者在EM发生发展中发挥重要作用.
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KiSS-1抑制骨肉瘤MG63细胞的侵袭和迁移
目的:探讨人肿瘤转移抑制基因KiSS-1对人骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移能力的影响.方法:构建KiSS-1表达质粒pSNAV2.0-KiSS-1.pSNAV2.0-KiSS-1质粒转染骨肉瘤MG63细胞,经G418筛选稳定表达KiSS-1基因的MG63细胞.应用real-time PCR、Western blotting检测KiSS-1 mRNA和蛋白的表达.Transwell小室法检测MG63细胞的侵袭力,millicell小室、细胞划痕愈合实验检测KiSS-1基因对MG63细胞迁移能力的影响.结果:成功建立pSNAV2.0-KiSS-1质粒并稳定转染MG63细胞(MG63-KiSS-1细胞),MG63-KiSS-1细胞高表达KiSS-1 mRNA和蛋白.转染KiSS-1质粒后的MG63细胞侵袭力显著降低(P<0.05);millicell法、细胞划痕愈合实验证实转染KiSS-1质粒后的MG63细胞迁移力也明显降低(P<0.05).结论:KiSS-1基因能显著抑制人骨肉瘤MG63细胞的侵袭和迁移能力,在骨肉瘤的转移中起重要作用.
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pcDNA3-KiSS-1质粒致孕鼠妊娠高血压综合征样病变的实验研究
目的探讨肿瘤转移抑制基因KiSS-1表达增高抑制滋养细胞浸润及其在大鼠妊娠高血压综合征(妊高征)发病中的作用.方法妊娠Wistar大鼠随机分为A、B、C三组,每组10只,A组(实验组)于妊娠0.5、7.5、14.5 d腹腔注射脂质体包埋的pcDNA3-KiSS-1质粒,B组(空质粒转染组)于同期腹腔注射脂质体包埋的pcDNA3空质粒,C组(对照组)同期腹腔注射生理盐水,观测血压、尿蛋白.于妊娠21.5d剖宫产,计数幼仔数量,并分别称取幼仔体重及胎盘重量,RTPCR检测胎盘KiSS-1 mRNA、基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA表达,并取大鼠胎盘、胎盘附着处子宫壁、肾、心、肝等脏器进行病理检查.结果(1)A组妊娠大鼠于妊娠1 5.5 d起血压增高(P＜0.05),并于妊娠17.5 d及19.5 d为明显(P＜0.01),与B组、C组同期相比差异有统计学意义(P＜0.01);(2)A组大鼠于妊娠14.5 d出现尿蛋白升高并持续至分娩,显著高于B组及C组(P＜0.01);(3)A组孕鼠所产仔鼠总数及体重均较B组及C组降低(P＜0.05),并且A组中有2例剖宫产时发现有流产胚胎;(4)经RT-PCR检测到A组10例大鼠中有7例其胎盘KiSS-1 mRNA表达阳性,而B组及C组均为阴性,A组胎盘MMP-9mRNA表达显著低于B组及C组(P＜0.05);(5)病理学检查结果提示A组大鼠肾小球肿胀,血管壁内皮细胞增生,肾小囊腔缩小,肾小动脉管壁增厚,管腔狭窄.三组胎盘、胎盘附着处子宫壁、心、肝等脏器未见明显差别.结论脂质体包埋的pcDNA3-KiSS-1质粒经整合至妊娠Wistar大鼠可在胎盘表达,出现血压升高、尿蛋白增高等妊高征样变化,并且胎盘MMP-9mRNA表达下降,提示KiSS-1基因表达增高导致滋养细胞浸润不足影响胎盘血管的生理性重铸,在妊高征发病中起重要作用.
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KISS-1基因与恶性肿瘤关系的研究进展
肿瘤转移是恶性肿瘤的基本生物学特性之一,是多个癌基因和抑癌基因参与调节的复杂过程.近年来,对肿瘤转移抑制基因的研究已成为肿瘤转移机制研究的热点.
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Kiss-1基因在双酚A诱导的雌性性早熟大鼠下丘脑中的表达
目的:探讨Kiss-1基因在环境内分泌干扰物双酚A诱导的雌性性早熟大鼠下丘脑中mRNA的表达.方法:正常21日龄清洁级SD雌性大鼠30只,随机分为3组:正常青春前期组(组1)、正常青春期组(组2)、双酚A组(组3).每天双酚A 400 mg/kg灌胃.RT-PCR法检测组1、组2和组3的Kiss-1 mRNA的表达.结果:与组1相比,组3下丘脑Kiss-1 mRNA水平增加了2.35倍,差异具有显著性(P＜0.05).组3与组2的Kiss-1 mRNA的表达差异无显著性(P＞0.05).结论:环境内分泌干扰物双酚A可导致雌性大鼠的性早熟,Kiss-1与双酚A诱发的性早熟中可能有关.
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KiSS-1基因对卵巢癌细胞HO8910生物学行为影响的实验研究
目的探讨肿瘤转移抑制基因KiSS-1对卵巢癌细胞株HO8910生物学行为的影响.方法含有人KiSS-1基因全长cDNA的重组真核表达载体pcDNA3-KiSS-1经酶切和测序鉴定正确后,转染卵巢上皮癌细胞侏HO8910,观察其KiSS-1 mRNA表达、细胞生长及增殖能力和细胞侵袭力的变化.结果pcDNA3-KiSS-1成功转染HO8910细胞,KiSS-1mRNA表达阳性,而亲本HO8910细胞为阴性.转染目的基因后细胞生长曲线、软琼脂克隆形成率等与未转染之细胞无显著性差异(P＞0.05),但细胞侵袭能力明显下降(P＜0.01),穿透Matrigel膜细胞数较未转染组明显减少(P＜0.01).结论KiSS-1基因对卵巢上皮癌细胞HO8910的生长、增殖能力无影响,但可抑制其侵袭能力.
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KiSS-1及MMP-9与子宫内膜异位症关系的研究进展
子宫内膜异位症(endometriosis,EM)严重影响中青年妇女的健康和生活质量,近年来发病率有明显增高趋势.虽为良性病变,但逆流入腹腔的内膜组织与腹膜发生异地黏附后,其浸润、转移及复发性呈现临床上的恶性行为,发病机制目前大多数学者接受的是经期逆流种植学说.
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KISS-1、Cath-D及VEGF在乳腺癌组织中的表达及相关性
目的:研究KISS-1、Cath-D及VEGF在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌临床病理学特征的关系,探讨三者在乳腺癌发病过程中是否具有相关性.方法:用免疫组织化学S-P法检测50例乳腺癌患者肿瘤组织和50例癌旁3 cm外正常乳腺组织中KISS-1、Cath-D及VEGF的表达水平.结果:①KISS-1在乳腺癌组织中的表达显著低于在正常乳腺组织中的表达(P＜0.01);Cath-D、VEGF在乳腺癌组织中的表达率显著高于在正常乳腺组织中的表达(P＜0.01).②KISS-1在有淋巴结转移乳腺癌中的表达显著低于无淋巴结转移乳腺癌(P＜0.05);Cath-D及VEGF在有淋巴结转移乳腺癌中的表达显著高于无淋巴结转移乳腺癌(P＜0.05). ③KISS-1与Cath-D及VEGF在乳腺癌组织中的表达均具有负相关性(P＜0.05).结论:KISS-1基因表达在抑制乳腺癌转移过程中起一定作用,KISS-1基因的失表达可能通过参与淋巴及血行转移促进乳腺癌的浸润转移.
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KiSS-1基因转染对骨肉瘤MG-63细胞增殖的抑制作用
目的 探讨KiSS-1基因转染对骨肉瘤MG-63细胞株增殖的影响及其可能机制,为骨肉瘤的基因治 疗提供实验室依据.方法 将KiSS-1基因转染至骨肉瘤MG--63细胞株,应用免疫组化法检测MG-63-KiSS-1蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测各期细胞比例.结果 MG-63-KiSS-1细胞KiSS-1蛋白高表达、增殖明显减慢 、G2/M期细胞比例明显增高.结论 KiSS-1基因转染MG-63细胞后可抑制其增殖,其机制可能与阻滞细胞周期于G2/M期有 关.
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KISS-1基因及其受体GPR54的表达与先兆子痫发病的相关性
目的 探讨KISS-1基因及其受体GPR54的表达与先兆子痫发生的相关性.方法 以实时定量RT-PCR检测先兆子痫患者胎盘滋养层细胞KISS-1基因及其受体GPR54 mRNA表达,以免疫组化和western-blot检测Kisspeptin蛋白表达.计量资料比较采用t检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 胎盘滋养层组织均表达KISS-1基因和其受体GPR54;先兆子痫患者胎盘KISS-1/GPR54免疫组化染色强度、mRNA及蛋白表达量均高于正常胎盘(均P＜0.05).结论 KISS-1/GPR54的异常表达可能是先兆子痫的发病机制.
