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PCR检测急性淋巴细胞白血病和非霍奇金淋巴瘤TCRγ基因重排时DNA提取方法的比较
我们对采用PCR检测急性淋巴细胞白血病（ALL）和非霍奇金淋巴瘤（NHL）TCRγ基因重排时提取DNA模板这一关键性问题进行了探索，现报告如下。1 材料与方法1.1 标本 12例ALL和4例NHL均为我院门诊及住院病人，符合诊断标准。 1.2 DNA提取 ①Triton X-100法：按文献黄俊军等（临床检验杂志，1995，13：192）方法进行。②低渗法:取0.5ml全血，离心去血浆，加120μl重蒸水，0℃放置5～10min，离心去上清，加0.2mol/L NaAc 0.1ml，蛋白酶K（6g/L）10μl，SDS（0.1g/ml）25μl， 6℃水浴4h后，按常规酚/氯仿法抽提。③细胞裂解法：全血与试剂比例是1∶20。65℃ 30s，8℃ 30s，65℃ 90s，97℃ 180s,8℃ 60s，65℃ 180s，97℃ 60s，65℃ 60s，80℃放置。
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皮下脂膜炎性T细胞性淋巴瘤的临床特征及分子生物学特点
目的:对皮下脂膜炎性T细胞淋巴瘤(SPTCL)的临床特征、病理、免疫表型及分子生物学特点进行研究.方法:临床观察及实验室、病理检查研究SPTCL的临床、病理特点,免疫表型通过用LCA、CD3、UCHL、L26单抗进行石蜡免疫过氧化物酶染色、用αβTCR、γδTCR抗体进行冷冻切片免疫过氧化物酶的染色,用识别V1δ、V2δ的抗体进行γδTCR亚型分析,PCR检测SPTCL患者TCR基因重排.结果:7例SPTCL患者均有皮下结节、高热、体重下降,5例出现嗜血细胞综合征,7例SPTCL患者均有电介质、酸碱平衡失调及酶学检查的异常.7例SPTCL患者的病理均在脂肪组织内见大量异型淋巴细胞浸润,均表达LCA、CD3、UCHL,不表达L26.4例SPTCL患者中有3例表达γδTCR,1例表达αβTCR,3例γδTCR患者均表达V2+δ,4例有3例出现TCRγ基因重排.结论:SPTCL大多病情严重,肿瘤细胞来源于T细胞系的皮肤淋巴细胞组织相关的V2+δ细胞,可以出现TCRγ基因重排.
关键词： T细胞淋巴瘤/皮下脂膜炎性 临床特征 免疫表型 TCRγ基因重排 -
老年急性淋巴细胞白血病分子生物学改变的初步观察
目的研究老年急性淋巴细胞白血病(ALL)的分子生物学特征. 方法应用多聚酶链反应技术(PCR)检测了16例老年ALL患者的bcr/abl融合基因、TCRγ基因重排(TCRγRA)以及IgH基因重排(IgHRA). 结果 16例患者中IgHRA 11例,TCRγRA 4例,两类基因重排均阴性1例;bcr/abl融合基因阳性9例,阳性率56.25%. 结论老年ALL以B-ALL为多,bcr/abl融合基因阳性率较高,可能是其治疗效果较差的原因之一.
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牛痘样水疱病样皮肤T细胞淋巴瘤
目的:根据3例种痘样皮肤T细胞淋巴瘤(hydroa vacciniforme-like CTCL)患者的临床表现、治疗及转归,进一步探讨该病的诊断和治疗.方法:分析3例hydroa vacciniforme-like CTCL患者的临床资料、实验室检查、治疗及转归.结果:3例患者均为幼年发病,皮损开始出现在曝光部位,反复发作,数月或数年后进展性或逐渐蔓延至非曝光部位,且伴有发热等全身症状.皮损组织病理显示真皮内致密的淋巴样细胞浸润达真皮下层甚至脂肪层,常侵犯血管;免疫组化组织病理显示浸润细胞以CD8(+)细胞为主;T细胞受体γ基因(TCRγ基因)呈单克隆性重排;EB(Epstein-Barr)病毒原位杂交(+).结论:该病与EB病毒感染有关.该病预后差,但干扰索治疗可改善症状.
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淋巴瘤克隆性TCRγ基因重排的多重引物分析
目的探讨TCRγ多重引物检测淋巴瘤克隆性基因重排的功效及意义.方法引物分为两组扩增淋巴瘤DNA,PCR产物用于琼脂糖电泳和单链构象多态性分析(SSCP)检测.结果两组多重引物PCR的阳性率高于通用引物阳性率;B细胞淋巴瘤组织中存在一定比例克隆性TCRγ基因生重排;部分淋巴瘤中存在两种TCRγ基因重排.结论多重引物和降落式PCR适于淋巴瘤TCRγ基因重排研究,可提高检出率、判断淋巴瘤组织中不同TCRγ基因重排情况;SSCP可排除假阳性.
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血浆游离DNA IgH和TCRγ基因克隆性重排在非霍奇金淋巴瘤诊断中的意义
目的 探讨非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者检测外周血血浆游离DNA免疫球蛋白重链基因(IgH)和T细胞受体gamma基因(TCRγ)克隆性重排的意义.方法 对235例NHL患者进行了254例次血浆游离DNA提取,通过globin基因确定血浆游离DNA存在,通过PCR方法检测IgH(FR3A/VLJH)和TCRγ(TVG/TJX)基因克隆性重排.并与病理组织DNA及外周血单个核细胞DNA基因克隆性重排结果同时进行对比观察.结果 初发及复发患者220例中219例均成功提取到血浆游离DNA.B-NHL患者140例中IgH重排阳性118例(84.3%),TCRγ重排阳性1例(0.7%);T-NHL患者80例中TCRγ重排阳性44例(55%),IgH重排阳性2例(2.5%),IgH和TCRγ重排同时阳性4例(5%);34例临床缓解病例中仅3例(8.8%)提取出血浆游离DNA,但IgH和TCRγ重排均阴性.56例NHL患者血浆游离DNA IgH或TCRγ基因重排结果与病理组织结果一致(P＞0.05).67例NHL患者血浆游离DNA与外周血单个核细胞DNA IgH和TCRγ基因重排结果显示,血浆游离DNA阳性率高于单个核细胞DNA(P＜0.05).结论 采用血浆游离DNA检测NHL患者IgH和TCRγ基因克隆性重排具有较高的临床诊断价值,与病理标本高度一致;标本取材简单方便,对NHL的治疗反应监测也有重要参考价值.
