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抗甲状腺中药的筛选实验
目的:筛选抗甲状腺中药.方法:300%中草药水煎液灌胃小鼠1个月,取血,放免法测定甲状腺激素含量.结果:穿山龙组FT3、FT4、TT3、TT4分别为(2.04±0.04)、(3.24±0.03)、(2.02±0.01)、(30.04±0.38),与模型组相比有极显著性差异(P＜0.01).结论:中药穿山龙具有抗甲状腺作用.
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Graves'病大鼠甲状腺组织超微病理改变及穿山龙对其的影响
目的:研究中药穿山龙对Graes'病大鼠甲状腺组织超微病理改变的影响.方法:Y.E菌尾静脉注射造成Graes'病大鼠模型,穿山龙灌胃1个月,取甲状腺,电镜技术观察大鼠甲状腺组织超微病理改变.结果:模型组大鼠甲状腺上皮细胞微绒毛增多,线粒体、粗面内质网、溶酶体丰富,核常染色质增多.穿山龙组上述情况明显改善.结论:穿山龙具有改善Graves'病大鼠甲状腺组织超微病理紊乱的作用.
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基于痛风性关节炎ABCG2尿酸转运靶点的穿山龙调控机制研究
目的:首次引入ABCG2尿酸转运蛋白,探讨其在痛风性关节炎中的作用机制和穿山龙总皂苷的干预作用.方法:通过Real-time PCR和Western blot方法,检测高尿酸血症小鼠肾脏ABCG2转运蛋白的mRNA和蛋白表达水平.结果:模型组mABCG2的mRNA和蛋白表达量均明显降低(P＜0.001).穿山龙总皂苷低剂量组可明显回调该基因的mRNA表达(P＜0.001),穿山龙总皂苷高、中剂量组均可回调ABCG2 mRNA表达(P＜0.05,P＜0.001).穿山龙总皂苷高、中、低剂量组均可回调ABCG2蛋白的表达(P＜0.001,P＜0.05和P＜0.05).结论:穿山龙总皂苷可通过对肾脏尿酸转运体ABCG2的调控来促进尿酸的排泄实现对高尿酸血症的降尿酸作用.
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常山混伪品穿山龙的鉴别应用
常山为虎耳草科植物常山Dichroa fedri-fugalour的干燥根.始载于<神农本草经>,列为下品.陶弘景谓:"常山出宜都,建平.细实茎者,皆为鸡骨常山,用之用胜."常山治疟,本经中已有载.近年笔者经过调查,发现部分用药单位误将穿山龙作为常山使用.穿山龙为薯蓣科植物穿龙薯蓣Dioscoyea nipponica Mak的根茎.当地俗称山常山、穿山龙等,因此,易于常山发生混淆,二者在来源,性状及功效应用上均不相同,现将易混伪品穿山龙鉴别特点以及与对照品常山的理化鉴定结果比较如下:
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基于连作障碍条件下穿山龙皂苷类活性成分的含量变化
目的：采用高效液相色谱法对不同连作条件下穿山龙中的皂苷类活性成分进行含量测定,探讨不同连作条件对于穿山龙皂苷类活性成分含量的影响。方法采用 RP-HPLC,色谱柱：Agilent TC-C18(4．6 mm ×250 mm,5μm)；乙腈( A)-水( B)为流动相梯度洗脱；流速1．0 mL/min,柱温：35℃,检测波长：203 nm,计算皂苷类成分含量,并采用SPSS等软件对所得结果进行分析。结果吉林通化种植基地的穿山龙中,除了甲基原薯蓣皂苷为连作一茬3年时含量高,其他三种皂苷类成分原薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷、薯蓣皂苷均为正茬4年时高,而后随着连作年限的增加,含量逐渐减少,并且原薯蓣皂苷与薯蓣皂苷含量呈正相关。结论穿山龙随着连作年限的增加,其皂苷类活性成分的含量也随之下降,说明连作障碍对其皂苷类活性成分的含量积累造成了影响,但正茬4年时其皂苷类成分总含量高,提示正茬4年为采收佳时间,这为该药材的质量控制及GAP规范种植提供了依据和示范。
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穿山龙对胰岛素抵抗糖尿病大鼠血糖改善作用及其机制
目的:观察穿山龙对胰岛素抵抗的糖尿病大鼠的治疗作用.方法:以高脂饲料+小剂量链脲佐菌素(30mg/Kg)制备胰岛素抵抗的糖尿病大鼠模型,随机分为穿山龙组、文迪雅组、对照组.正常组一直以普通饲料饲养.实验组分别给予穿山龙、文迪雅、蒸馏水灌胃,至血糖下降至正常组平均水平或与造模时相比有显著性差异为治疗有效,有效者处死,若至总灌胃时间3个月时则无论是否治疗有效均处死,并测定不同时期的体重、尿素氮、肌酐、总胆固醇、甘油三酯、胰岛素.结果:高脂饮食1月斤实验组大鼠体重及胰岛素明显升高,注射STZ后实验组大鼠血糖明显升高:药物干预后各实验组大鼠各实验阶段GLU、BUN、CRE、TC、TG、ins和体重的差异均有显著性,其中穿山龙组利文迪雅组GLU明显下降,穿山龙纤血-糖较治疗前平均下降8.49mol/L(约40%),文迪雅组血糖下降7.03mmol/L(约33%):两组胰岛素均明显高于对照组,且文迪雅组高于穿山龙组,但均未达到正常水平;各实验组的TC、TG均明显下降.结论:穿山龙与文迪雅有相似的降糖作用,且胰岛素增敏作用可能优于文迪雅.
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穿山龙指纹图谱及其抑制人肝癌HepG2细胞增殖活性相关性研究
目的 建立穿山龙的高效液相色谱指纹图谱,研究其化学成分与抑制肿瘤细胞增殖活性的相关性,为该药的质量控制提供依据.方法 色谱柱为Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为水和乙腈,采用梯度洗脱方式,柱温为35℃,检测波长为210 nm.对样品进行高效液相色谱指纹图谱分析和抑制肿瘤细胞的增殖活性试验,采用相关分析和多元线性回归分析方法将活性数据与各指纹峰数据相关联.结果 在HPLC指纹图谱中,确立了20个共有峰,其中10个色谱峰与抗癌活性显著相关,这10个化学成分可能是穿山龙抗肿瘤的活性成分；结合多元线性回归分析结果与系统聚类分析结果,可将样品按照活性高低分类.结论 穿山龙高效液相色谱指纹图谱结合其抗癌活性研究可为评价穿山龙药材的质量提供依据.
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RP-HPLC法同时测定穿山龙中薯蓣皂苷和纤细皂苷的含量
目的 建立测定不同产地穿山龙供试品中薯蓣皂苷和纤细皂苷含量的方法.方法 采用RP-HPLC法.色谱柱为Kromasil C8色谱柱(200 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(体积比41:59),检测波长为206 nm,柱温为室温.结果 薯蓣皂苷质量浓度在0.10～1.00 g·L-1内、纤细皂苷质量浓度在0.02～0.20 g·L-1内与峰面积呈现良好的线性关系,相关系数均为0.999 7(n=6).其平均回收率分别为101.2%、100.7%,RSD分别为2.4%、2.0%(n=9).供试品含量测定结果表明,饮片中薯蓣皂苷和纤细皂苷的含量显著高于新鲜药材烘干品.结论 该方法简便、准确、重现性好,为穿山龙药材的质量控制提供了参考.
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穿山龙提取物联合哈尔满碱对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响
目的 观察穿山龙提取物(extract from Dioscoreae nipponicae Rhizoma,DNR)联合哈尔满碱(harmane)对人肝癌细胞(HepG2)增殖抑制作用及诱导凋亡的机理.方法 采用MTT法检测药物对细胞的生长抑制作用,应用等效曲线-相互指数法(isobole-interaction index method)评价两药的相互作用,倒置显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,Western印迹法检测凋亡蛋白procaspase-3的表达.结果 穿山龙提取物(DNR)与哈尔满碱质量浓度比为2∶1时,Ⅰ(相互指数)=0.768＜1,联合用药具有协同作用；质量浓度比为1∶2时,I=1.041≈1.0,联合用药具有相加作用.FCM法检测联合用药48、72 h细胞凋亡率与单独用药相比分别增加了10.44％、50.06％,差异具有统计学意义(P＜0.05).Western印迹法检测联合用药诱导HepG2细胞凋亡的机制之一可能与procaspase-3蛋白的表达有关.结论 DNR联合哈尔满碱在体外有明显的协同抗肿瘤的作用,其可能的机制是影响procaspase-3蛋白的表达.
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穿山龙的临床应用及其用量探究
通过搜集、整理、总结现代医家关于穿山龙的临床经验,得出穿山龙有以下特点:1)临床多用10～80 g.2)结合疾病、证型、症状选择其佳用量,如穿山龙在发挥祛风湿、通经络功效时,治疗痹症(如风湿性关节炎、强直性脊柱炎等)、皮肤病(如干燥型湿疹),为12～50 g;补虚时,治疗免疫性血小板减少症、高尿酸血症、甲亢、慢性肾炎等,为10～60 g.3)根据疾病、证型及症状,配伍相应中药,如祛风湿、通经络常配伍苍术、桂枝、地龙;补虚常配伍赤白芍、生熟地、当归等.
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自拟中药方治疗股骨头坏死
股骨头坏死在骨科临床中常见.现代医学认为西医对本病发病机制尚未形成共识[1],治疗手段多是手术移植与置换等[2],中医药治疗本病取得较好疗效[3-4].笔者于2010年采用中药自拟方治疗1例股骨头坏死患者,取得满意疗效.兹介绍如下.1 病案举例周某,男,28岁,湖北黄石人.于2009年初开始自觉左大腿内侧根部疼痛,步行加重.于各医院求治,多诊断为腰突症、坐骨神经痛,并以推拿按摩为主要治疗手段,未见任何好转.2010年3月,患者于笔者处求治.患者述,发病前曾从人字梯上摔下,髋部着地.左下肢有萎缩."4"字试验阳性,髋关节外展内收活动稍受限,疼痛明显,腹股沟区深部压痛、臀后深部压痛、足跟叩击髋关节传导痛、髋部侧方叩击痛.
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穿山龙药理及临床研究
穿山龙的主要成分为薯蓣皂苷,具有调节免疫等多种药理作用.现代已作为甾体激素药物和抗冠心病皂苷类药物的重要工业原料.主要药理作用有抗炎、平喘、抗肿瘤、降低血糖、降血尿酸等作用.临床主要用于治疗支气管哮喘、风湿性关节炎、肿瘤、糖尿病等.
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薯蓣皂苷对IBS-D模型大鼠治疗作用研究
目的:研究穿山龙提取物薯蓣皂苷对腹泻型肠易激综合征模型(IBS-D)大鼠的治疗作用.方法:番泻叶灌胃法制作IBS-D大鼠模型,治疗3周后,检测大鼠血清5-HT、血浆SP、血浆VIP含量变化.结果:造模后大鼠血清5-HT、血浆SP、血浆VIP含量显著升高,薯蓣皂苷治疗后,大鼠血清5-HT、血浆SP、血浆VIP含量均下降,其中高剂量组效果明显.结论:薯蓣皂苷可能通过调整5-HT、SP、VIP等胃肠激素的分泌、释放,进而调整肠道运动、增强肠道黏膜免疫、降低肠道敏感性,从而起到治疗IBS-D的作用.
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穿山龙提取物薯蓣皂苷对TNBS诱导的IBS大鼠VIP表达的作用
目的:探讨血管活性肠肽在三硝基苯磺酸诱导的肠易激综合征大鼠中的表达量及中药穿山龙提取物薯蓣皂苷的干预作用.方法:TNBS诱导大鼠肠易激综合征模型,第 2、7、14和28天对大鼠体质量、髓过氧化物酶活力、疼痛阈值、VIP含量进行测定.结果:TNBS诱导的肠易激综合征大鼠体质量降低,髓过氧化物酶活力增加,疼痛阈值降低,模型大鼠中性粒细胞内炎症标记物过氧化物酶的表达比正常大鼠明显升高,证实TNBS处理后诱导了大鼠的炎症,TNBS处理大鼠后血浆VIP浓度比对照组显著增加(P<0.05),穿山龙提取物薯蓣皂苷处理后显著下调.结论:VIP表达的改变在肠易激综合症中可能起着重要作用,穿山龙提取物中药薯蓣皂苷对TNBS诱导的IBS大鼠具有治疗作用.
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穿山龙对Graves'病大鼠甲状腺激素的影响
目的:研究中药穿山龙对Graves病大鼠甲状腺激素的影响.方法:Y.E茵尾静脉注射复制Graves病大鼠模型,中药穿山龙灌胃,取血,放免法测定甲状腺激素含量.结果:穿山龙组TT3、TT4、FT3、FT4分别为5.38±0.52、65.23±0.36、3.66±0.42、5.89±0.46,与模型组相比有极显著性差异(P＜0.001).结论:中药穿山龙具有抗甲状腺作用.
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穿山龙降糖制剂的降糖药理作用研究
目的:本实验筛选穿山龙提取物降血糖有效部位,为制备穿山龙降糖制剂做基础准备.方法:应用大鼠模型,通过测定空腹血糖、糖化血红蛋白、空腹血清胰岛素等指标,确定穿山龙降血糖有效部位.结果:治疗前后各组大鼠体重呈逐渐下降趋势,正常组呈增长趋势;治疗前后正常组大鼠空腹血糖呈水平变化,穿山龙组血糖表现为下降趋势、二甲双胍组大鼠空腹血糖呈先下降后上升趋势,模型组大鼠空腹血糖呈逐渐增长趋势;治疗8周后,模型组、穿山龙组、二甲双胍组与正常组比较,均有统计学意义(P<0.01);治疗8周后,模型组、二甲双胍组空腹血清胰岛素水平与正常组比较,穿山龙组空腹血清胰岛素水平与正常组比较,均有统计学意义(P<0.05).结论:穿山龙降血糖有效部位具有较好的治疗效果,可制备成穿山龙降糖制剂.
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内生菌液体发酵提高穿山龙提取物中薯蓣皂苷元的含量
目的:分离提取穿龙薯蓣内生真菌,筛选能够发酵提高穿山龙药材提取物中薯蓣皂苷元含量的功能菌种.方法:采用PDA培养基分离纯化穿龙薯蓣内生真菌,将内生真菌与灭菌后穿山龙药材提取物在恒温振荡培养箱中,120 r/min,28℃培养7天.以高效液相法测定发酵物中薯蓣皂苷元的含量,并与原药材提取物、灭菌药材提取物以及未灭菌药材提取物的发酵物进行比较.结果:分离提取穿龙薯蓣内生真菌102种,其中C39菌能够稳定提高灭菌后穿山龙提取物中薯蓣皂苷元的含量,提高幅度达原药材提取物的20％-30％.结论:经液体发酵,穿龙薯蓣内生真菌C39能够稳定提高穿山龙药材提取物中薯蓣皂苷元的含量.
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穿山龙中薯蓣皂苷酶提取工艺的优化
目的 优化穿山龙中薯蓣皂苷酶提取工艺.方法 以薯蓣皂苷提取率为评价指标,单因素试验考察酶解时间、酶解温度、酶解pH、液料比、提取时间、提取温度、乙醇体积分数,再通过响应面法优化提取工艺.结果 佳条件为酶解温度44℃,酶解pH4.9,酶解时间1.9h,液料比9∶1,薯蓣皂苷提取率为4.757％,与预测值(4.764％)接近.结论 该方法合理、准确、可靠,可用于酶提取穿山龙中的薯蓣皂苷.
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穿山龙中薯蓣皂苷元的萃取与测定
目的 萃取穿山龙中的薯蓣皂苷元,并测定其含有量.方法 加压两相酸水解法从穿山龙中水解萃取出薯蓣皂苷元,然后采用HPLC法测定其含有量.条件为Agilent Eclipse XDB C18色谱柱(150 mm ×4.6 mm,5μm);以乙腈-水为流动相,等度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长203 nm;柱温35℃.结果 薯蓣皂苷元在2.910～1 490μg/mL范围内线性关系良好(R2=0.999 7),平均加样回收率99.71％,RSD=2.12％.与直接酸水解法相比,加压两相酸水解法下薯蓣皂苷元含有量明显提高,硫酸消耗量、反应时间明显减少.结论 该方法稳定可靠,可用于穿山龙中薯蓣皂苷元的萃取与测定.
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Gravse病大鼠甲状腺细胞NIS mRNA的表达及中药穿山龙对其的影响
GD(Graves disease)的发病涉及多个环节,NIS(sodium iodide symporter,Na+/I-symporter,钠/碘转运体)是位于甲状腺细胞基底膜上的一类膜抗原,在甲状腺对碘的主动转运过程中发挥重要作用.
