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癌胚抗原与γ-干扰素核酸疫苗对机体特异性细胞免疫的激活作用
目的:检测以双表达质粒pIRES为载体构建的带有全序列癌胚抗原(carcinoembryonic antigens,CEA)基因和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)基因的核苷酸疫苗对机体特异性抗肿瘤免疫反应的激活效果.方法:利用分子生物学技术,将CEA基因片段和IFN-γ基因片段连接于真核双表达质粒pIRES中,用肌肉注射方法接种核酸疫苗;检测疫苗在小鼠肌肉组织中的表达及其对小鼠脾细胞CEA特异性细胞免疫反应的激活效果.结果:小鼠经肌肉注射质粒后,核酸疫苗可在体内有效表达CEA和IFN-γ分子;小鼠特异性淋巴细胞增殖反应明显增高,并且伴有自然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)活性显著增高,F=15 289.67,P<0.001.结论:实验所构建的核酸疫苗pIRES-CEA、pIRES-CEA-IFN-γ和pIRES-CEA-IFN-γ等可在小鼠体内高效表达,并表现出良好的细胞免疫原性.
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含CEA片段的重组腺病毒转染DCs诱导特异性T细胞对结直肠癌细胞株的体外杀伤作用
目的:探讨人外周血单核细胞来源的树突状细胞转染含CEA片段的重组腺病毒后所诱导的特异性T细胞对直肠癌细胞株LOVO和SW480的体外杀伤作用.方法:抽取HLA表型为A11的健康志愿者外周血,分离单核细胞,体外培养,使用含CEA片断的重组腺病毒转染未成熟DCs,诱导特异性T细胞.检测体外培养的DCs和CTL活性,并使用MTT法检测CTL对LOVO细胞的杀伤作用.结果:转染或未转染的体外培养的成熟DCs高表达CD40、CD86,IL-12,诱导的CTL细胞高表达IFN-Υ;转染后DCs诱导特异性CTL可有效识别并杀伤HLA-A11阳性的LOVO细胞.结论:重组腺病毒转染DCs,不明显改变DCs表型和刺激淋巴细胞增殖、分化功能,可诱导自体CTL增殖,含CEA片断的腺病毒转染DCs诱导自体CTL对LOVO细胞有明显杀伤作用.
