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@腺病毒文献资料
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大鼠SOCS3腺病毒的构建及鉴定
目的:构建大鼠细胞因子信号途径抑制物3 (SOCS3)腺病毒载体,并对腺病毒感染后的HEK293细胞的SOCS3表达情况进行观察.方法:提取大鼠腹腔巨噬细胞中总RNA,克隆出SOCS3基因,亚克隆于含有GFP报告基因的穿梭质粒pAdtrack-CMV,通过pAdeasy-1腺病毒系统将含有目的基因的穿梭质粒和骨架质粒共转入BJ5183感受态细胞.线性化重组的病毒转染入HEK293细胞,并在其中对重组的腺病毒进行包装及扩增.结果:构建的大鼠SOCS3腺病毒能够高效率的感染HEK293细胞,mRNA和蛋白水平均证实SOCS3表达显著增加.结论:大鼠SOCS3腺病毒载体构建成功,可用于体内转染或细胞试验的进一步研究.
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含CEA片段的重组腺病毒转染DCs诱导特异性T细胞对结直肠癌细胞株的体外杀伤作用
目的:探讨人外周血单核细胞来源的树突状细胞转染含CEA片段的重组腺病毒后所诱导的特异性T细胞对直肠癌细胞株LOVO和SW480的体外杀伤作用.方法:抽取HLA表型为A11的健康志愿者外周血,分离单核细胞,体外培养,使用含CEA片断的重组腺病毒转染未成熟DCs,诱导特异性T细胞.检测体外培养的DCs和CTL活性,并使用MTT法检测CTL对LOVO细胞的杀伤作用.结果:转染或未转染的体外培养的成熟DCs高表达CD40、CD86,IL-12,诱导的CTL细胞高表达IFN-Υ;转染后DCs诱导特异性CTL可有效识别并杀伤HLA-A11阳性的LOVO细胞.结论:重组腺病毒转染DCs,不明显改变DCs表型和刺激淋巴细胞增殖、分化功能,可诱导自体CTL增殖,含CEA片断的腺病毒转染DCs诱导自体CTL对LOVO细胞有明显杀伤作用.
