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基于生物信息学数据库分析卵巢癌组织UBE2C表达及意义
目的 泛素结合酶E2C(ubiquitin-conjugating enzyme E2C,UBE2C)在多种癌症中过表达且与患者的不良预后相关,但关于UBE2C在卵巢癌中的具体作用及潜在功能尚不清楚.本研究探讨UBE2C在卵巢癌组织中的表达、临床意义及潜在功能.方法 Oncomine及人类蛋白质图谱(the human protein atlas,HPA)在线数据库分析UBE2C在正常卵巢组织及卵巢癌组织中的表达差异.选取中国医科大学附属盛京医院2016-12-01-2017-05-01手术治疗的72例卵巢组织标本,其中卵巢癌组织45例,正常卵巢组织26例,采用RT-qPCR法检测UBE2C表达水平.从癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库下载卵巢癌组织中关于UBE2C的RNAseq数据及临床数据,分析UBE2C表达与卵巢癌临床病理参数及预后的关系.基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)探讨UBE2C在卵巢癌中的潜在功能.结果 Oncomine及HPA数据库分析结果均提示与正常卵巢组织相比,UBE2C在卵巢癌组织中高表达.RT-qPCR验证结果显示,UBE2C在正常卵巢组织及卵巢癌组织中表达水平分别为1.023±0.102、3.457±0.541,差异有统计学意义,t=2.684,P=0.0091.TCGA数据分析结果显示,过表达的UBE2C与卵巢癌患者的不良组织学分级相关,χ2=5.684,P=0.017.Cox回归分析结果表明,UBE2C可能是卵巢癌患者不良预后的独立风险因素,HR=1.324,95％CI:1.003～1.749,P=0.04.GSEA分析结果表明,UBE2C在细胞周期调控及同源同组修复通路相关基因集中高度富集.结论 UBE2C在卵巢癌的发生发展进程中发挥重要作用,可为将来UBE2C抑制剂在卵巢癌治疗的临床前研究提供理论依据.
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UBE2C在神经母细胞瘤组织表达及临床意义分析
目的 通过检测泛素偶联酶2C(UBE2C)在神经母细胞瘤(NB)患儿中的表达情况,分析其表达与NB患儿的临床特征及预后的相关性.方法 收集上海交通大学医学院附属新华医院2012年1月至2015年1月51例NB患儿术后石蜡包埋的组织样本,通过免疫组织化学方法检测其UBE2C蛋白的表达水平.回顾性分析NB惠儿的临床特征,采用Kaplan-Meier法分析其生存曲线.结果 51例患儿中,男女比例为1.8∶1,中位诊断年龄为36个月(3.3 ～ 156.0个月),中位随访时间为25.6个月(5.5～42.7个月).免疫组化结果显示,Ⅲ、Ⅳ期患儿UBE2C蛋白表达的阳性率(90.0％)明显高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅳs期患儿(47.6％)(P＜ 0.001);复发NB患儿的UBE2C表达阳性率(91.3％)明显高于无复发者(57.1％)(P=0.001).生存曲线分析显示,UBE2C蛋白阳性表达组预后较差(P=0.006).结论 UBE2C的表达与NB的分期及复发密切相关,UBE2C表达阳性提示NB患儿预后不良.UBE2C可能在NB侵袭、转移和复发过程中发挥重要的作用,有望成为NB潜在的生物标记物和治疗新靶点.
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UBE2C siRNA抑制去势抵抗性前列腺癌PC3细胞的增殖及侵袭
目的:探讨人类泛素偶联酶E2C (ubiquitin-conjugating enzyme E2C,UBE2C)基因沉默对去势抵抗性前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭的影响.方法:应用RT-PCR及蛋白质印迹法检测前列腺癌LNCap、PC3、DU145和C4-2细胞中UBE2C mRNA及蛋白的表达水平.将UBE2C siRNA转染入PC3细胞后,应用RT-PCR及蛋白质印迹法检测UBE2C mRNA及蛋白的表达水平,MTT法检测细胞的增殖能力,Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力,蛋白质印迹法检测细胞外调节蛋白激酶1/2 (extracellular regulated protein kinase 1/2, ERK1/2)、磷酸化ERK1/2 (phospho-ERK1/2,p-ERK1/2)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)和磷酸化Akt (phospho-Akt,p-Akt)蛋白的表达水平.结果:PC3、DU145和C4-2细胞中UBE2C mRNA和蛋白的表达水平显著高于LNCap细胞(P值均＜0.05).UBE2C siRNA转染后,PC3细胞中UBE2C mRNA及蛋白的表达水平均被抑制(P值均＜0.05);UBE2CsiRNA转染组PC3细胞的增殖能力和侵袭能力显著下降(P值均＜0.01),p-ERK1/2和p-Akt蛋白的表达水平被显著抑制(P值均＜0.01).结论:UBE2C基因沉默能够显著抑制去势抵抗性前列腺癌PC3细胞的增殖和侵袭,这一作用可能与下调ERK信号通路蛋白的活化有关.
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泛素偶联酶UBE2C/UbcH10在消化道肿瘤中的研究进展
素偶联酶UBE2C是泛素—蛋白酶体通路(UPP)中重要的成员之一,UBE2C/UbcH10的过表达不仅与恶性肿瘤的病因学有直接关系,并且与恶性肿瘤的发展和预后有着密切的关系,该文就泛素偶联酶的结构功能、作用机制及其在消化道肿瘤中的研究进展作一综述,为其用于消化道肿瘤病因学研究提供理论基础.
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pcDNA3.1(-)/UBE2C质粒在Chang Liver细胞中的表达和鉴定
目的 构建pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒并建立人正常肝细胞Chang Liver的稳定表达株.方法 采用RT-PCR法从HepG2细胞中克隆得到UBE2C cDNA全长序列,将它与pMD18-T栽体连接.双酶切和测序鉴定后,再将UBE2C片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-).构建好的pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒经双酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将其转入Chang Liver细胞株中,经G418筛选,得到阳性克隆细胞株,再用Western blot法检测转染后UBE2C的蛋白表达水平.结果 pcDNA3.1(-)/UBE2C质粒经双酶切鉴定和DNA测序证实,目的 基因UBE2C的序列完全正确,真核表达质粒成功构建.Western blot检测显示,转pcDNA3.1(-)/UBE2C组UBE2C的蛋白表达水平高于转pcDNA3.1(-)组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 成功构建UBE2C基因的真核表达质粒并建立其稳定表达的Chang Liver细胞株,为下一步研究奠定基础.
关键词： UBE2C 真核表达质粒 Chang Liver 构建 表达 -
靶向抑制UBE2C基因对SMMC-7721细胞生物学行为的影响
目的 将构建好的UBE2C干扰质粒转入SMMC-7721细胞中,观察其对SMMC-7721细胞生物学行为的影响.方法 采用脂质体法将构建好的UBE2C干扰质粒转入SMMC-7721细胞株中,潮霉素筛选4周,并经Western blot鉴定,选出干扰效果佳的低表达稳定株(shUBE2C组)用于后续实验.用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,软琼脂克隆形成实验检测克隆形成能力.结果 Western blot检测显示,转shUBE2C组UBE2C的蛋白表达水平低于转阴性对照shNC组(P＜0.05).shUBE2C组的SMMC-7721细胞生长曲线明显右移,显示靶向抑制UBE2C可降低SMMC-7721细胞的增殖能力.与shNC组相比,shUBE2C组细胞的G1期细胞比例明显增高(P＜0.05),而S期的比例明显降低(P＜0.05),提示其延缓细胞周期进程.shUBE2C组的克隆形成率明显低于shNC组(P＜0.05),提示其降低克隆形成能力.结论 UBE2C低表达可改变SMMC-7721细胞的生物学行为.
关键词： UBE2C 干扰 SMMC-7721细胞 增殖 细胞周期 -
过表达泛素偶联酶E2C对293T细胞增殖的影响
目的:构建稳定过表达人类泛素偶联酶E2C (uBE2C)的293T人胚肾细胞株,初步探讨其对293T细胞增殖的影响.方法:采用脂质体法将已成功构建的pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒转入293T人胚肾细胞株中,随后经G418筛选4周,得到阳性克隆细胞株;用Western blot技术检测并鉴定UBE2C基因在293T细胞中的表达情况;用MTT法检测UBE2C对293T细胞增殖的影响.结果:Western blot检测显示,转pcDNA3.1(-)/UBE2C组293T细胞的UBE2C蛋白表达水平明显高于转pcDNA3.1(-)组(P＜0.01).MTT法检测结果显示转pcDNA3.1(-)/UBE2C组293T细胞的增殖速度明显快于转peDNA3.1(-)组(P＜0.01).结论:成功建立稳定过表达UBE2C的293T细胞株,过表达UBE2C可促进293T细胞的增殖.
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采用基因表达数据集分析UBE2C与膀胱癌临床病理特征和预后的相关性
目的 分析UBE2C基因表达与膀胱癌患者临床病理特征及预后的相关性.方法 采用Oncomine数据库整合分析出肌层浸润性膀胱癌与正常膀胱组织表达差异显著的基因作为候选目的基因,然后采用GSE13507基因表达数据集来分析该目的基因与膀胱癌临床病理特征和预后的相关性.结果 Oncomine数据库分析得到UBE2C为差异显著的基因.GSE13507基因表达数据集分析结果显示,UBE2C基因表达水平在男性中高于女性(P=0.005),在肌层浸润性膀胱癌患者中高于非肌层浸润性膀胱癌患者(P=0.001),在T分期(P=0.001)和N分期(P=0.036)更高者高于分期更低者,在肿瘤进展患者中高于无进展患者(P=0.011);但在患者年龄(P=0.264)、远处转移(P=0.711)和肿瘤复发(P=0.481)方面无统计学差异.UBE2C基因诊断膀胱癌的曲线下面积为0.804,生存分析显示UBE2C基因高表达组的预后差于低表达组(HR=1.82,95％CI:1.13～2.94,Log-rank P=0.011).结论 UBE2C基因高表达可能与膀胱癌肌层浸润、高T分期、高N分期和不良预后相关.
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UBE2C在结直肠癌中的研究现状与进展
世界范围内,结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的发病率在恶性肿瘤中排名第三,其死亡率位居第四.近年来,随着人们生活水平的提高和生活方式及饮食结构的改变,CRC的发病率及死亡率呈上升趋势.尽管CRC早期诊断有所改善,但转移性CRC患者的总体5年生存率仍然很低.泛素蛋白酶体系统(ubiquitin proteasome system,UPS)是细胞质和细胞核内的一种依赖ATP的蛋白质降解途径.它通过泛素化-蛋白酶体-去泛素化机制调节其降解的蛋白质以维持体内的稳态.当调节的蛋白质失去稳定性时,会诱发癌症等疾病.泛素偶联酶(UBE2C)又名泛素结合酶10(UBH10),它在UPS中具有重要的生物学作用,是细胞周期进展和周期蛋白降解所必需的.UBE2C在CRC患者组织中高度表达,并且与肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭性、预后和放化疗敏感性相关.目前已经证实UBE2C可作为CRC诊断、预后、淋巴结转移的潜在肿瘤标志物及CRC基因治疗的新靶点.本文就近年来关于UBE2C在CRC中的研究进展加以综述.
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基于TCGA数据库挖掘UBE2C在肾透明细胞癌中的表达及预后意义
目的:通过研究泛素偶联酶E2C(ubiquitin-conjugating enzyme E2C,UBE2C)在肾透明细胞癌(kid-ney renal clear cell carcinoma,KIRC)组织中的表达,阐明其对KIRC早期诊断及预后的影响.方法:利用Onco-mine、GEPIA数据库和人类蛋白质表达图谱(The Human Protein Atlas,HPA)分析UBE2C在KIRC组织中mR-NA和蛋白质水平的变化.运用LinkedOmics和GEPIA数据库阐述UBE2C表达与KIRC临床病理学参数的相关性及对预后的影响.在String-DB数据库中探索UBE2C基因在细胞信号转导通路中的位置以及与其关系密切的上下游基因.结果:UBE2C的mRNA在KIRC中表达增加,并且与KIRC病理分级、TNM分期呈正相关,且与种族和人种相关(P＜0.05).我们应用TCGA分析的结果显示:高水平UBE2C是KIRC总生存率和无病生存率不良的独立预后因素(P＜0.01).IHC结果证实,与正常肾组织相比,KIRC中UBE2C的蛋白表达量显著升高(P＜0.05).与UBE2C相关的蛋白有ANAPC10、ANAPC11、ANAPC2、ANAPC4、ANAPC5、AUR-KA、AURKB、CCNB1等,可能参与细胞周期检查点及蛋白泛素化等细胞功能.结论:通过TCGA数据库信息挖掘发现,UBE2C在KIRC组织中呈高表达,且与患者生存期有关,将为后续的肾癌研究提供重要的理论依据.
