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热休克蛋白70和90α在人胃癌组织中表达及其与胃癌生物学行为的关系
目的:研究热休克蛋白70和90α在人胃癌组织和正常黏膜组织中的表达,探讨其表达与胃癌生物学行为的关系.方法:41例胃癌组织和相应的正常黏膜组织分别行免疫组织化学染色和RT-PCR检测,分析检测结果.结果:热休克蛋白70和90α在胃癌组织中表达分别为75.6%(31/41)和80.5%(33/41),明显高于正常黏膜组织中的表达,在分化较差的肿瘤类型中表达分别为85.2%和88.9%,高于分化较好的肿瘤类型,在淋巴结转移阳性的病例中分别为82.8%和86.2%,高于淋巴结转移阴性的病例,在TNM分期Ⅲ、Ⅳ期的病例中表达分别为80.6%和83.9%,高于其他分期.结论:热休克蛋白70和90α在胃癌组织中明显表达升高,且在晚期的病例中表达高于相对较早期的病例,与胃癌的生物学行为有关.
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热休克蛋白90通过抑制Bid裂解抑制NIH3T3成纤维细胞凋亡
目的:探讨热休克蛋白90(heat shock proteins90,HSP90)抑制肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor d,TNFα)和放线菌酮(cycloheximide,CHX)诱导的细胞凋亡作用机制.方法:采用电穿孔技术建立稳定过表达HSP90的细胞克隆;应用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪,观察TNFα/CHX诱导的细胞凋亡及HSP90对细胞凋亡的拮抗作用;应用Western blottjng及免疫沉淀方法,检测HSP90是否直接作用于Bid(BH3 interacting death agonist)及HSP90抑制剂格尔德霉素的功能.结果:在稳定过表达HSP90的NIH3T3细胞中,HSP90能够抑制TNF-α/CHX诱导的细胞凋亡;HSP90通过直接与Bid结合阻止Bid的裂解来抑制TNFα/CHX诱导的细胞凋亡;HSP90的特异性抑制剂格尔德霉素可以拮抗HSP90,阻止Bid裂解.结论:HSP90的大量存在(即使在生理条件下)不仅通过促进蛋白质的折叠,而且通过阻止Bid的裂解而保持前凋亡因子的惰性状态,使细胞免于凋亡,对细胞稳态的维持发挥重要作用;HSP90抑制剂作为抗肿瘤药物的一个作用机制,可能通过促进Bid从HSP90复合物中释放,进而促进肿瘤细胞凋亡.
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HSP90抑制剂靶向治疗癌症研究进展
1 HSP90结构和功能热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是生物体中普遍存在的高度保守的蛋白质,根据分子量大可分为HSP100、HSP90、HSP70、HSP60和小HSP五大家族,尤以HSP90和HSP70与信号分子如v-Sro、Raf-l、AKT、类固醇激素受体关系密切,在细胞恶性转化和转移过程中发挥重要作用[1].HSP90在多肽的重新折叠中不发挥主要作用,而在调节构象不稳定的底物或受体蛋白转导后成熟中起关键作用.
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蛋白质分子伴侣和以其为靶的药物作用机制
蛋白质从新生态到天然态的折叠中,大多数都依赖于已经存在的功能蛋白质即蛋白质分子伴侣.在目前研究的20多种分子伴侣中,对于Hsp60如E.coli中的GroEL和GroES的功能和结构研究得多,也详细,其主要功能是帮助非天然态的多肽折叠成具有生物活性的天然态功能蛋白质.蛋白质分子伴侣除折叠功能外,还可以作为药物如格尔德霉素(geldanamycin,GA)作用的靶点,GA通过与蛋白质分子伴侣Hsp90作用,影响其底物的正确折叠而被降解,达到其作用之目的.
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gp96多肽复合物介导的细胞毒性T淋巴细胞对食管腺癌细胞的免疫杀伤作用
目的:研究肿瘤细胞来源的gp96多肽复合物介导的对同一类型肿瘤的免疫治疗作用.方法:提取纯化食管腺癌细胞系SEG-1裸鼠成瘤组织的gp96蛋白多肽复合物,与外周血单个核细胞(PBMNC)诱导培养的树突状细胞(DC)结合,制备gp96-DC疫苗;台盼蓝拒染法测定淋巴细胞增殖率;ELISA方法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)培养上清液的γ干扰素(IFN-γ)含量,MTT法检测CTL对靶细胞SEG-1的杀伤率.结果:55 g瘤组织提取纯化gp96蛋白120μg;单独DC、单独gp96及gp96-DC均能刺激淋巴细胞增殖,产生CTL,释放IFN-γ,对靶细胞SEG-1均显示一定的杀伤作用,以gp96-DC的作用明显,在效靶比40:1时,杀伤率为68%.单独DC诱导的CTL对SEG-1、K562的杀伤作用与非抗原刺激的淋巴细胞比较,统计学差异无显著性.结论:肿瘤来源的热休克蛋白gp96可使DC具有更强的刺激T淋巴细胞增殖的能力,所产生的CTL对靶肿瘤细胞有明显的特异杀伤作用.
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巨噬细胞移动抑制因子对大鼠糖皮质激素释放及其受体的影响
目的 评价巨噬细胞移动抑制因子(MIF)对大鼠糖皮质激素释放及其受体的影响.方法 实验Ⅰ性SD大鼠32只,体重250-300g,随机分为4组(n=8),对照组(C组)经右侧股静脉注射生理盐水1 ml;重组MIF(rMIF)低剂量组(rMIF-L组)、rMIF中剂量组(rMIF-M组)及rMIF高剂量组(rMIF-H组)分别经右侧股静脉注射rMIF 50、100、200 ng.分别于注射前即刻(T0)、注射后5 min、3、6、12及24 h(T1-3)时,取股动脉血样0.5 ml,测定血清皮质酮浓度.实验Ⅱ DMEM培养液中培养的乳鼠(出生2-3 d)心肌细胞,随机分为3组(n=24),对照组(C组)不做任何处理;rMIF-L组、rMIF-M组分别加入rMIF 50、100 ng,孵育3 h后采用Western blot法测定心肌细胞糖皮质激素受体及热休克蛋白90(HSP9O)的表达.结果 实验Ⅰ与C组比较,rM-L组、rMI-M组及rMIF-H组T1-5时血清皮质酮浓度升高(P<0.05);三组间差异无统计学意义(P>0.05).实验Ⅱ与C组比较,rMIF-L组和rMIF-M组心肌细胞HSP90表达下调(P<0.05);两组问差异无统计学意义(P>0.05);三组间糖皮质激素受体表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 脓毒血症时MIF可通过下调HSP90表达,减弱糖皮质激素受体功能,诱发糖皮质激素抵抗.
关键词： 巨噬细胞移动抑制因子 糖皮质激素类 受体 糖皮质激素 热休克蛋白质90 -
肝硬化门静脉血管病变与Hsps的关系
近年来,NO(一氧化氮)与肝硬化门脉高压血流动力学紊乱之间的关系越来越受到重视.NO作为一种新型递质,在门脉高压高动力循环和血管病变中起着重要作用,通过增加门静脉血流量,参与了肝硬化PHT的形成和维持.许多实验证实eNOS是产生NO的主要酶原,进一步的研究证实eNOS上调和eNOS源性NO产生是体循环动脉舒张和血管阻力降低的主要原因.近证明内皮细胞在受到机械和体液等因素刺激后,eNOS与Hsp(热休克蛋白质)90的交互作用能够促进NO生成,Geldanamycin(GDM或GA)通过抑制Hsp90信号系统而抑制NO生成.而Hsp90隶属于一个庞大的热休克蛋白家族,我们期望在研究中证实和发现其他热休克蛋白在肝硬化病变中各自的改变及其相互作用.
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白念珠菌热休克蛋白90的表达及其与耐药性的关系
目的：检测白念珠菌热休克蛋白90（Hsp90）的表达水平，探讨 Hsp90和白念珠菌耐药性的关系。方法采用荧光定量聚合酶链反应（RT‐PCR）方法分别检测10株对伊曲康唑敏感白念珠菌和10株对伊曲康唑耐药白念珠菌的H sp90的表达情况，并分析其与白念珠菌耐药性的关系。结果对伊曲康唑耐药白念珠菌中H sp90表达量（1．5±0．9）×105明显高于对伊曲康唑敏感白念珠菌中H sp90表达量（0．7±0．3）×105，且差异有统计学意义（ P ＜0．05）。结论 H sp90可能在白念珠菌耐药性的产生和维持过程中起着重要作用，H sp90的过度表达可能是白念珠菌耐药的重要机制之一。
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热休克蛋白90抑制剂格尔德霉素对白色念珠菌耐药性的影响
目的：探讨热休克蛋白90（HSP90）抑制剂格尔德霉素（GA ）对白色念珠菌体外诱导耐药菌株耐药性的影响，以期证实HSP90抑制剂的体外抗真菌作用。方法用 HSP90抑制剂GA处理对特比萘芬片具有稳定耐药性的白色念珠菌体外诱导耐药菌株AC2013112-R ，参照美国国家临床试验室标准化委员会（NCCLS）推荐的M27VA药敏试验方案的微量稀释法，应用氧化还原指示剂Alamarblue通过比色判定低抑菌浓度（MIC）值，分别检测格尔德霉素处理前后白色念珠菌ATCC90028-R菌株对特比萘芬的体外敏感性。结果经过格尔德霉素处理后，对特比萘芬片具有稳定耐药性的白色念珠菌体外诱导耐药菌株 AC2013112-R的对特比萘芬的MIC值从≥512μg/mL降低为64μg/mL。结论 HSP90的抑制剂GA具有体外抗念珠菌活性，这种抑菌作用可能与GA的药理作用及白色念珠菌菌株产生耐药性的方式有关。
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人结肠癌中热休克蛋白70、90α和90βmRNA的表达及其意义
热休克蛋白(HSP)高表达可增强肿瘤细胞的抗凋亡能力,使细胞生长抑制效应减弱,细胞死亡减少.HSP70和HSP90是HSP家族中拮抗细胞凋亡的两种主要蛋白,可能在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用.目的:探讨人结肠癌中Hsp70、Hsp90α和Hsp90β mRNA的表达及其意义.方法:取31例结肠癌手术标本的癌组织、癌旁组织和正常组织,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Hsp70、Hsp90α和Hsp90β基因转录水平的表达.以单因素方差分析了解各结肠组织中基因表达水平的差异,以相关分析研究癌组织和正常组织中各基因表达的相关性.结果:结肠癌组织中Hsp70、Hsp90α和Hsp90β mRNA的表达水平均显著高于癌旁组织和正常组织.正常组织中Hsp70、Hsp90α和Hsp90β mRNA的表达两两之间均存在相关性,而癌组织中仅Hsp70与Hsp90α mRNA的表达之间存在相关性.结论:Hsp70、Hsp90α和Hsp90β在人结肠癌的发生、发展过程中起有一定作用.
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热休克蛋白90在人脑恶性胶质瘤的表达及其作用
目的探讨热休克蛋白90(HSP90)在人脑恶性胶质瘤的表达及其在肿瘤增殖、分化中的作用.方法应用免疫组织化学法对45例人脑恶性胶质瘤的HSP90表达进行观察,并与增殖细胞核抗原(PCNA)的表达对比分析.结果低度恶性与高度恶性胶质瘤HSP90α阳性细胞分别为(36.0±7.1)%和(66.6±6.8)%;HSP90β阳性细胞百分比分别为(46.0±7.3)%和(89.0±3.6)%,两种HSP90异构体在高度恶性组中的表达均高于低度恶性组(P＜0.05).HSP90β在高度恶性组血管内皮细胞的阳性率(69.9%)明显低于低度恶性组(9.1%).HSP90α的表达与PCNA指数密切相关(P＜0.05).结论 HSP90两个同功异构体的作用有所不同;HSP90α与胶质瘤细胞增殖有关,HSP90β通过促进肿瘤血管生成促进胶质瘤细胞恶性分化.
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热休克蛋白HSP 70、90α在非霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义
目的 研究热休克蛋白(HSP)70、90α在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的表达并探讨其意义.方法 应用免疫组化法检测HSP70、90α在30例NHL组织中的表达,并结合临床指标进行分析.10例坏死性淋巴结炎和12例淋巴结反应性增生组织作为对照.信果HSP70、90α在NHL、坏死性淋巴结炎和淋巴结反应性增生组织中均有高水平表达.HSPT0高表达(阳性率大于50%)与NHL恶性程度、分期及治疗反应密切相关(P<0.05),与是否有B症状、是否累及结外无关(P>0.05).HSP90α高表达与上述指标无相关性(P>0.05).结论 检测NHL组织中HSP70的表达程度有助于判断NHL的恶性程度、分期及治疗反应.
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乙型肝炎病毒X蛋白对肝癌细胞热休克蛋白90α基因表达的影响
乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)与肝细胞癌的发生高度相关.我们前期研究发现,热休克蛋白(heat shock protein,HSP)90α在转染HBV X基因的人肝癌HepG2细胞中异常过表达[1].
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HSP90在离体人真皮成纤维细胞热损伤中的保护作用
目的:探讨人真皮成纤维细胞热损伤变性后HSP90的保护作用.方法:培养的人真皮成纤维细胞在52℃,30 s热水损伤24 h后用免疫荧光观察HSP90表达部位的改变并与正常组比较,用Western Blot 进一步分析正常的FB和热变性的FB在3, 6, 12, 24, 48, 72, 96及120 h时相点HSP90表达量的改变.结果:用免疫荧光观察到FB热损伤后24 h胞质胞核中出现HSP90高表达.Western Blot显示3 h即有HSP90表达量升高,24 h达到高峰,维持到96 h,120 h恢复到正常.结果:FB热变性可以引起HSP90异常高表达,HSP90对FB热损伤具有保护作用.
