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重组人白介素-24蛋白对荷人A375细胞黑素瘤裸鼠的抑瘤作用
目的 研究原核表达及纯化、复性的重组人白介素24蛋白(recombined human interlukin 24,rhIL-24)对荷人A375细胞黑素瘤裸鼠的抑制肿瘤生长的作用.方法 将人A375黑素瘤细胞注射至裸鼠体内,待肿瘤生长到一定体积后,向裸鼠的肿瘤内注射rhIL-24,2周后切取肿瘤称重、量体积,进行病理检查及免疫组化检测.结果 经rhIL-24注射的肿瘤体积及重量与对照组相比明显减小、减轻;Bax基因表达上调、Bcl-2、CD34及VEGF基因表达下调,显示肿瘤细胞生长受到抑制,凋亡率增加.结论 rhIL-24对荷人A375细胞黑素瘤裸鼠的肿瘤有显著抑制生长的功能,可促进A375细胞凋亡,而对裸鼠则无明显的不良反应.
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Mimecan基因、核因子-κB和白介素-24与子痫前期相关性研究
目的 探讨Mimecan基因、核因子-κcB (NF-κB)和白介素-24(IL-24)在子痫前期(preeclampsia,PE)中的表达及其相关性.方法 根据子痫前期临床表现将98例子痫前期分为轻度子痫前期组(轻度PE组,53例)、重度子痫前期组(重度PE组,45例);选择正常健康孕妇48例作为对照组.采用酶联免疫法(ELISA)检测孕妇血清中Mimecan基因、NF-κB和IL-24的表达.结果 子痫前期组患者Mirnecan基因、NF-κB和IL-24的表达水平分别为(10.98±0.82) mg/L、(21.97±3.87) mg/L和(0.79±0.26) mg/L,对照组分别为(4.78±0.63) mg/L、(16.73±4.31) mg/L和(0.38±0.13) mg/L,两组比较,差异有统计学意义(P均＜0.05);Mimecan基因、NF-κB和IL-24与子痫前期严重程度呈正相关(r分别为0.687、0.733和0.821,P均＜0.05).结论 子痫前期的发生发展可能与Mimecan基因、NF-κB和IL-24有关.
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白介素-24与肺癌
白介素-24(IL-24)即是黑色素瘤分化相关基因-7(mda-7),属于IL-10家族成员,除具免疫刺激应答功能外,还被认为是一抑癌基因.IL-24可以抑制多种肺癌细胞的生长,其主要机制是提高肿瘤抑制基因表达,减少原癌基因的表达,促进凋亡,以及抑制肿瘤血管生成.IL-24还具有增加肺癌细胞对射线敏感性的作用.IL-24有望成为肿瘤临床综合治疗的有效手段之一.
关键词： 白介素-24 黑色素瘤分化相关基因-7 肺癌 -
Ad-hIL-24体外诱导喉癌细胞Hep-2的凋亡作用
目的 研究腺病毒介导的人白细胞介素-24(hIL-24)基因选择性诱导喉癌细胞Hep-2凋亡的作用.方法 将携带有hIL-24基因的重组复制缺陷型腺病毒(Ad-hIL-24)感染喉癌细胞Hep-2,并以人胚肺成纤维细胞WI-38为对照,采用RT-PCR法检测Hep-2、WI-38细胞中外源性hIL-24基因表达;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)及流式细胞术等方法检测细胞的生长和凋亡情况.结果 腺病毒介导的hIL-24基因能在Hep-2细胞和WI-38细胞中表达;MTT法显示Ad-hIL-24能明显抑制喉癌细胞Hep-2的生长.LSCM观察结果表明Ad-hIL-24能促进喉癌细胞Hep-2凋亡,流式细胞术显示Hep-2细胞经Ad-hIL.24感染48 h后凋亡率为18.47%,G2/M期细胞百分比为38.9%,显著高于PBS组、Ad-GFP组和WI-38细胞,差异有高度统计学意义(P<0.01).结论 Ad-hIL-24能抑制喉癌细胞Hep-2生长和诱导Hep-2细胞凋亡,但对正常细胞无毒性作用.
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真核双基因表达载体pIRES-IL-24-ES的构建与鉴定
目的 构建白介素24(IL-24)与内皮抑素(ES)的真核双基因表达栽体,检测它们在体外的表达.方法 从外周血和人胎肝组织中经RT-PCR分别扩增IL-24与ES cDNA序列,并将其定向克隆至真核双基因表达质粒pIRES中,重组质粒pIRES-IL-24-ES,经酶切及测序鉴定后,转染NIH3T3成纤维细胞.经RT-PCR及ELISA法检测IL-24和ES在NIH3T3中的表达.结果 重组真核双基因表达载体pIRES-IL-24-ES构建成功,IL-24与ES可在NIH313细胞中有效表达.结论 真核双基因表达载体pIRES-IL-24-ES成功构建为研究肿瘤的基因治疗提供了一定线索.
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IL-24-TRAIL基因载体的构建及其对乳腺癌干细胞迁移和凋亡的影响
目的 构建真核表达载体pIRES-IL-24-TRAIL,探讨其对乳腺癌干细胞迁移和凋亡的影响.方法 以人胎盘组织总RNA为模板,采用RT-PCR.二步法,扩增TRAIL的cDNA序列,将其克隆入pIRES载体,扩增IL-24的cDNA序列,将其克隆入pIRES-TRAIL载体,构建重组真核表达载体pIRES-IL-24-TRAIL,以Lipofectamine2000转染技术,将质粒pIRES-IL-24-TRAIL导入乳腺癌干细胞MCF-7和MDA-MB-231,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,划痕实验比较不同组间细胞迁移情况.结果 (1)克隆到TRAIL、IL-24基因的cDNA序列,成功构建其真核表达载体.(2)流式细胞仪发现,实验组比对照组细胞凋亡率高(P＜0.05).(3)细胞划痕实验显示实验组细胞迁移能力明显低于对照组(p＜0.05).结论 pIRES-IL-24-TRAIL构建成功,并能诱导乳腺癌干细胞凋亡、降低其迁移能力.
关键词： 白介素-24 肿瘤坏死因子可溶性相关凋亡诱导配体 乳腺癌干细胞 迁移 凋亡 -
plRES-IL-24-TRAIL基因载体的构建及其对肝癌细胞迁移和凋亡的影响
目的 构建真核表达载体pIRES-IL-24-TRAIL,探讨其对肝癌细胞迁移和凋亡的影响.方法 以人胎盘组织总RNA为模板,采用RT-PCR二步法,扩增TRAIL的cDNA序列,将其克隆入pIRES载体,扩增IL-24的cDNA序列,将其克隆入pIRES-TRAIL载体,构建其真核瞬时表达载体pIRES-IL-24-TRAIL,以Lipofectamine2000转染技术,将TRAIL、IL-24基因导入肝癌细胞Bel-7402和PLC,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,划痕实验比较不同组间细胞迁移情况.结果 ①克隆到TRAIL、IL-24基因的cDNA序列,成功构建其真核表达载体;②流式细胞仪发现,实验组比对照组凋亡率高(P＜0.05);③细胞划痕实验显示实验组细胞迁移能力明显低于对照组(P＜0.05).结论 pIRES-IL-24-TRAIL构建成功,并能诱导肝癌细胞凋亡、降低其迁移能力.
关键词： 白介素-24 肿瘤坏死因子可溶性相关凋亡诱导配体 肝癌 迁移 凋亡 -
白介素-24抑制胶质瘤细胞生长的体内外实验研究
目的 探讨白介素-24 基因转染对胶质瘤生长的影响.方法 将载有人白介素-24 cDNA 的新型重组腺病毒(Ad5F35-IL24)感染人胶质瘤细胞系 U251,体外观察 Ad5F35-IL24 对该细胞系生长的影响;建立人胶质瘤动物模型,瘤内注射 AdSF35-IL24,观察肿瘤生长情况;用流式细胞仪检测其凋亡和Bax/Bcl-2 的表达情况.结果 AdSF35-IL24 感染U251 细胞和肿瘤组织后,IL-24 蛋白高表达,U251 细胞和组织的生长受到明显抑制,其凋亡率明显升高,Bax/Bcl-2 也明显升高.结论 白介素-24 具有抑制人胶质瘤细胞系U251生长和诱导凋亡作用.Ad5F35-IL24 转导白介素-24 基因可能是一种有效的胶质瘤基因治疗途径.
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hTERT启动子特异驱动IL-24重组腺病毒的包装及鉴定
目的 包装并鉴定人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子特异驱动白介素-24(IL-24)的重组复制缺陷型腺病毒.方法 全基因合成优化后的hTERT启动子,插入质粒pGL3-basic的多克隆位点(pGL3-phTERT);从人外周血单核细胞扩增IL-24,插入pGL3-phTERT质粒的hTERT启动子下游获得pGL3-phTERT-IL24;随后将phTERT-IL24插入pShuttle中间质粒,使用AdEasyTM Adenoviral Vector System包装Ad-phTERT-IL24重组腺病毒;同时包装CMV启动子驱动IL-24的腺病毒载体为阴性对照(Ad-CMV-IL24),以空载腺病毒Ad作为空白对照.用20 MOI重组腺病毒感染SGC-7901、MKN-45、HF细胞,采用PCR及Western blot检测IL-24在RNA及蛋白水平的表达.结果 成功包装Ad-hTERT-IL24重组腺病毒.感染Ad-hTERT-IL24后,hTERT阳性肿瘤细胞内IL-24表达显著上调,但hTERT阴性的HF细胞则无IL-24表达;感染阴性对照Ad-CMV-IL24后,hTERT阳性或阴性细胞内均有IL-24表达,感染空白对照Ad后,hTERT阳性或阴性细胞内均无IL-24表达.结论 Ad-hTERT-IL24腺病毒载体可有效介导IL-24特异表达于hTERT阳性肿瘤细胞内.
