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pIRES-scFvCD 44-TRAIL 对人乳腺癌细胞株抑制作用的研究
目的：探讨CD44单链抗体scFvCD44、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（ TRAIL）双基因共表达真核载体（pIRES-scFvCD44-TRAIL）对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株的抑制作用。方法①细胞实验：采用RT-PCR二步法构建pIRES-scFvCD44-TRAIL并转染MDA-MB-231细胞（转染组）；设转染pIRES空质粒的空白组及不作任何处理的阴性组。转染24 h后采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况，计算细胞凋亡率；行划痕试验比较各组细胞迁移情况，计算划痕愈合率。②移植瘤实验：建立乳腺癌荷瘤裸鼠模型8只并随机分为实验组及对照组。实验组皮下注射pIRES-scFvCD44-TRAIL 100μL／只，隔日1次，共5次；对照组注射等量生理盐水。观察两组移植瘤生长情况，计算抑瘤率；采用免疫组化法检测两组瘤组织中Ki67的表达水平。结果①细胞实验：转染组细胞凋亡率明显高于、划痕愈合率明显低于空白组和阴性组。②移植瘤实验：观察组抑瘤率为79．8％；观察组Ki67的阳性细胞率明显低于对照组，P＜0．05。结论 pIRES-scFvCD44-TRAIL可抑制人乳腺癌细胞及其移植肿瘤的生长及转移。
关键词： CD44单链抗体 肿瘤坏死因子可溶性相关凋亡诱导配体 乳腺癌 -
IL-24-TRAIL基因载体的构建及其对乳腺癌干细胞迁移和凋亡的影响
目的 构建真核表达载体pIRES-IL-24-TRAIL,探讨其对乳腺癌干细胞迁移和凋亡的影响.方法 以人胎盘组织总RNA为模板,采用RT-PCR.二步法,扩增TRAIL的cDNA序列,将其克隆入pIRES载体,扩增IL-24的cDNA序列,将其克隆入pIRES-TRAIL载体,构建重组真核表达载体pIRES-IL-24-TRAIL,以Lipofectamine2000转染技术,将质粒pIRES-IL-24-TRAIL导入乳腺癌干细胞MCF-7和MDA-MB-231,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,划痕实验比较不同组间细胞迁移情况.结果 (1)克隆到TRAIL、IL-24基因的cDNA序列,成功构建其真核表达载体.(2)流式细胞仪发现,实验组比对照组细胞凋亡率高(P＜0.05).(3)细胞划痕实验显示实验组细胞迁移能力明显低于对照组(p＜0.05).结论 pIRES-IL-24-TRAIL构建成功,并能诱导乳腺癌干细胞凋亡、降低其迁移能力.
关键词： 白介素-24 肿瘤坏死因子可溶性相关凋亡诱导配体 乳腺癌干细胞 迁移 凋亡 -
plRES-IL-24-TRAIL基因载体的构建及其对肝癌细胞迁移和凋亡的影响
目的 构建真核表达载体pIRES-IL-24-TRAIL,探讨其对肝癌细胞迁移和凋亡的影响.方法 以人胎盘组织总RNA为模板,采用RT-PCR二步法,扩增TRAIL的cDNA序列,将其克隆入pIRES载体,扩增IL-24的cDNA序列,将其克隆入pIRES-TRAIL载体,构建其真核瞬时表达载体pIRES-IL-24-TRAIL,以Lipofectamine2000转染技术,将TRAIL、IL-24基因导入肝癌细胞Bel-7402和PLC,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,划痕实验比较不同组间细胞迁移情况.结果 ①克隆到TRAIL、IL-24基因的cDNA序列,成功构建其真核表达载体;②流式细胞仪发现,实验组比对照组凋亡率高(P＜0.05);③细胞划痕实验显示实验组细胞迁移能力明显低于对照组(P＜0.05).结论 pIRES-IL-24-TRAIL构建成功,并能诱导肝癌细胞凋亡、降低其迁移能力.
关键词： 白介素-24 肿瘤坏死因子可溶性相关凋亡诱导配体 肝癌 迁移 凋亡
