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盐酸埃克替尼对人肺腺癌细胞系PC-9作用的比较蛋白质组学研究
目的 应用比较蛋白质组学方法分析盐酸埃克替尼作用前后人肺腺癌细胞系PC-9细胞相关蛋白的变化,从蛋白质水平探讨埃克替尼的作用机制.方法 应用人类EGFR基因突变检测试剂盒和实时定量PCR仪检测PC-9细胞EGFR突变;应用MTI法检测埃克替尼对PC-9细胞增殖的影响;应用双向凝胶电泳(2-DE)技术分别对未经干预的PC-9细胞总蛋白和经埃克替尼作用的PC-9细胞总蛋白进行分离,获得蛋白质表达谱;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)结合生物信息学进行蛋白质鉴定.结果 PC-9细胞的EGFR基因存在第19外显子缺失突变;在104-10-9M浓度范围内,埃克替尼明显抑制PC-9细胞的生长,且呈浓度依赖;埃克替尼诱导前后表达水平≥1.5倍的蛋白点共有56个.选取差异≥1.7倍的29个蛋白点进行MALDI-TOF-MS分析,终鉴定出16种蛋白质.根据功能,这些蛋白可分为代谢酶类、细胞骨架类、分子伴侣、信号传导分子、转录及翻译相关蛋白.结论 应用比较蛋白质组学方法初步鉴定了16种蛋白质,这些蛋白质与埃克替尼作用机制密切相关,部分可能成为新的分子治疗靶点.
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隐丹参酮抗肺腺癌作用的研究
目的 探讨隐丹参酮(CPT)对人肺腺癌细胞株A549和PC-9诱导凋亡的作用及其可能机制.方法 不同浓度的CPT分别作用A549和PC-9细胞24和48h,CCK-8法检测细胞存活率,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1染色流式细胞术检测线粒体膜电位的变化,Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)和信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路相关蛋白磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白的表达水平.结果 CPT能够抑制A549和PC-9细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性.CPT作用于A549和PC-9细胞24h后,细胞凋亡率随CPT浓度增加呈增长趋势,而线粒体膜电位降低.CPT作用于A549和PC-9细胞后cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3和cleaved PARP蛋白表达水平增加,p-STAT3蛋白表达水平下降.结论 CPT对人肺腺癌细胞A549和PC-9有显著的增殖抑制作用和诱导凋亡效应,线粒体凋亡途径和STAT3信号通路可能参与了这一过程.
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盐酸埃克替尼对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制探讨
目的 观察盐酸埃克替尼对非小细胞肺癌PC-9细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制.方法 取对数生长期的PC-9细胞,以40 μmol/L盐酸埃克替尼培养0、2、4、8、12、24h,以0、20、40、60、80 μmol/L的盐酸埃克替尼处理12 h,采用MTT法检测细胞增殖活性;将对数生长期的PC-9细胞分为给药组和对照组,分别以40 μmol/L盐酸埃克替尼、DMSO处理8h,用流式细胞仪检测凋亡细胞并计算凋亡率,Western blot法检测JAK2、p-JAK2、信号转导与激活因子3(STAT3)、p-STAT3和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白,细胞免疫荧光技术观察并计算STAT3入核细胞百分率.结果 随着盐酸埃克替尼浓度的增加及作用时间的延长,PC-9细胞增殖活性逐渐降低,40、60、80μmol/L与0μmol/L比较,8、12、24 h与0h比较,P均＜0.05.给药组PC-9细胞凋亡率3.70％±0.39％,明显高于对照组的1.40％±0.21％,P＜0.05.与对照组比较,给药组p-JAK2、p-STAT3相对表达量均减少(P均＜0.05),VEGF蛋白相对表达量亦减少(P＜0.01).给药组STAT3入核细胞百分率为36.48％±2.12％,低于对照组的86.56％±1.82％ (P＜0.01).结论 盐酸埃克替尼可抑制非小细胞肺癌细胞增殖,促进细胞凋亡;其可能通过抑制JAK2-STAT3信号通路活性及STAT3入核,并下调VEGF蛋白表达发挥作用.
