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微小核糖核酸-34a对大鼠肥厚心肌组织肌球蛋白重链α基因表达的调控
目的:探讨微小核糖核酸-34a(miRNA-34a)对左心室肥厚大鼠心肌组织肌球蛋白重链α基因表达的调控及其意义.方法:将40只雄性SD大鼠随机分为4组(n=10),分别为腹主动脉缩窄术后皮下注射miRNA-34a表达阻遏物组(ant-34a/AAC组),腹主动脉缩窄术后皮下注射miRNA-34a表达阻遏物阴性对照物组(con/AAC组),假手术后皮下注射miRNA-34a表达阻遏物组(ant-34a/SH组),假手术后皮下注射miRNA-34a表达阻遏物阴性对照物组(con/SH组).模型建立第12周存活大鼠:ant-34a/AAC组6只,con/AAC组7只,ant-34a/SH组8只,con/SH组8只.测定各组大鼠左心室收缩压、左心室舒张末期压及压力大变化速率,计算心肌肥厚指数,观察心肌组织病理学改变,应用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测大鼠左心室心肌组织miRNA-34a、肌球蛋白重链α基因表达水平.结果:与con/AAC组相比,ant-34a/AAC组心肌肥厚指数、左心室收缩压、左心室舒张末期压以及miRNA-34a相对表达量降低,压力大变化速率、肌球蛋白重链α基因相对表达量明显升高(P均＜0.05).与con/AAC组相比,con/SH组心肌肥厚指数、左心室收缩压、左心室舒张末期压以及miRNA-34a相对表达量明显降低,压力大变化速率、肌球蛋白重链α基因相对表达量明显升高(P均＜0.05).与con/SH组相比,ant-34a/SH组miRNA-34a相对表达量明显降低,肌球蛋白重链α基因相对表达量明显升高(P均＜0.05),心肌肥厚指数、左心室收缩压、左心室舒张末期压、压力大变化速率差异无统计学意义(P＞0.05).结论:压力负荷性左心室肥厚大鼠心肌组织中miRNA-34a表达上调,肌球蛋白重链α基因表达减少,利用特异性阻遏物阻断miRNA-34a表达可使大鼠肥厚心肌组织肌球蛋白重链α基因表达水平增高,减轻或者延缓心肌肥厚、提高心肌顺应性、改善心功能.
关键词： 心肌肥厚 微小核糖核酸-34a 肌球蛋白重链α -
miR-34a与人乳腺癌细胞系MCF-7多柔比星耐药的关系
目的 探讨miR-34a对人乳腺癌细胞系MCF-7多柔比星(Adr)耐药性的影响及其潜在分子机制.方法 用低浓度逐步加量诱导法,建立MCF-7的Adr耐药细胞系(MCF-7/Adr),用miRNA芯片结合RT-qPCR筛选并验证miRNA在MCF-7/Adr及MCF-7细胞中的表达差异;用生物信息学软件对miR-34a进行基因靶向预测;通过miR-34a模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)转染实验结合MTT、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)观察miR-34a的表达变化对细胞耐药性的影响,western blot检测转染后Notch1蛋白表达水平.结果 成功构建MCF-7/Adr耐药亚系;与MCF-7细胞相比,MCF-7/Adr中有156个差异表达miRNA;其中miR-34a的表达水平明显降低(t=11.597,P=0.000).与阴性对照组相比,转染miR-34a mimic后MCF-7/Adr细胞miR-34a表达水平增高(t=8.013,P=0.001),且增加了对Adr的敏感性(t=18.160,P=0.000);转染miR-34a inhibitor后MCF-7细胞miR-34a的表达水平降低(t=9.979,P=0.000),且降低了对Adr的敏感性(t=4.130,P=0.009).靶基因预测结果显示,Notch1为miR-34a的特异性靶基因.western blot结果表明,与空白对照组和阴性对照组相比,MCF-7/Adr细胞转柒miR-34a mimic后,Notch1蛋白的表达水平下降(F =64.949,P=0.000).MCF-7细胞转染miR-34a inhibitor后,Notch1蛋白的表达水平升高(F=10.938,P =0.010).结论 MCF-7/Adr及MCF-7细胞miRNA表达谱存在差异;miR-34a参与调节细胞对Adr的耐药过程,Notch1基因可能是调控靶基因之一.
关键词： 乳腺癌 多柔比星 微小核糖核酸-34a Notch1 耐药 -
上调microRNA-34a抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭
目的 探讨microRNA-34a(miR-34a)在胶质瘤组织中的表达情况以及对人脑胶质瘤细胞系U251增殖及侵袭的影响.方法 选取川北医学院附属医院2013年3月至2017年3月胶质瘤组织标本30例和重症脑外伤需行手术者正常脑组织标本10例作为研究对象,采用荧光定量PCR法检测miR-34a在胶质瘤组织表达情况.体外实验,将人工合成的miR-34a模拟物miR-34a mimic转染至U251细胞系,采用荧光定量PCR、MMT、Transwell法检测miR-34a在U251细胞系中表达以及对U251细胞增殖和侵袭能力的影响.依据细胞转染情况,分为Control组(不转染任何基因)、Mock组(转染miRNA-neg序列)和miRNA-34 a mimic组(转染miRNA-34a mimic序列).结果 miRNA-34a在人脑胶质瘤组织中相对表达水平为(0.35±0.07),低于正常人脑组织的(1.00±0.13),差异有统计学意义(P<0.05);转染后,荧光定量PCR结果显示,Control组、Mock组、miRNA-34a mimic组miRNA-34a相对表达水平分别为(1.00±0.08)、(0.98±0.11)和(6.19±0.34),miRNA-34a mimic组与Control、Mock组比较,差异有统计学意义(P<0.05);MMT结果显示,在不同时间点,miRNA-34a mimic组U251细胞增殖抑制率高于Control组、Mock组,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell结果显示,Control组、Mock组、miRNA-34a mimic组侵袭细胞数分别为(90.53±5.84)个、(88.21±5.04)个和(27.46±2.76)个,miRNA-34a mimic组与Control、Mock组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论miR-34a在胶质瘤组织中表达下调,上调miR-34a表达可抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭.
关键词： 微小核糖核酸-34a 胶质瘤细胞 增殖 侵袭
