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Th17细胞因子在CD大鼠结肠不同炎性时期的差异表达
目的:观察不同次数三硝基苯磺酸(trinitro-benzene-sulfonic acid,TNBS)灌肠刺激对大鼠肠道炎症程度及结肠组织Thl7细胞因子白介素(interleukin,IL)-6、IL-17A、IL-21、维甲酸相关孤核受体γt(retinoid-related orphan nuclear receptorγt,RORγt)表达的影响.方法:30只清洁级♂SD大鼠,160 g±10 g,随机分为正常对照组(NG)、1 wk造模组、2wk造模组、3 wk造模组、4 wk造模组.按照Morris等方法制备克罗恩病(Crohn's disease,CD)大鼠模型,TNBS灌肠液由5％TNBS与500 mL/L的乙醇按2∶1比例混合而成,1次/wk.采用结肠一般形态和HE病理观察TNBS 对结肠黏膜的病理损伤程度,荧光定量PCR、免疫组织化学等技术观察各组大鼠结肠黏膜中RORγt、IL-17A的表达,ELISA法观察血清中IL-6、IL-21含量的变化.结果:大鼠结肠IL-17A mRNA水平在第1次TNBS诱导后表达为下降,在3 wk时,IL-17AmRNA与蛋白水平明显升高(P＜0.05),第4次诱导后达到高.大鼠结肠RORγt蛋白随着刺激次数的增加而表达量逐渐增高(P＜0.05),第4次诱导后达到高(P＜0.05);血清中IL-6、IL-21含量也均在1 wk时间点即开始显著上升(P＜0.01),在第4周达到高值.模型大鼠结肠组织大体形态评分和组织损伤评分显著增加(P＜0.01).结论:TNBS诱导CD模型过程中,Th17细胞因子IL-6、IL-17A、IL-21、RORγt的含量随着刺激次数的增加而逐渐增加,并伴随结肠炎症程度的加重而逐渐加重.
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清金化痰汤对慢性阻塞性肺疾病急性加重期模型大鼠肺组织 Foxp3和 RORγt 表达的影响
目的：探讨清金化痰汤对慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）模型大鼠肺组织叉头翼状螺旋转录因子 P3（Foxp3）、维甲酸相关孤核受体γt（RORγt）表达的影响。方法40只 SPF Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、清金化痰汤组、克拉霉素组。除正常组外，其余组采取气道滴注脂多糖（LPS）联合烟熏的方法建立 AECOPD 气道黏液高分泌模型，并同时连续30 d 分别给予生理盐水、清金化痰汤（8．4 g／kg）、克拉霉素（50 mg／kg）灌胃。实验第31天，提取大鼠肺组织，制作病理切片，并采用免疫组化法检测肺组织中黏蛋白5AC（Muc5AC）、中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）的表达，观察 Foxp3和 RORγt 的表达，免疫印迹法检测肺组织中 Foxp3和 RORγt 的蛋白表达。结果与正常组比较，模型组 Foxp3表达量无明显差异（P ＞0．05），RORγt、Muc5AC、NE 表达显著升高，Foxp3／RORγt 显著下降（P ＜0．01）；清金化痰汤组与模型组比较，Foxp3表达量无明显差异（P ＞0．05），RORγt、Muc5AC、NE 表达显著降低，Foxp3／RORγt 显著升高（P ＜0．01或 P ＜0．05）。清金化痰汤组与克拉霉素组比较，Muc5AC 显著降低（P ＜0．05）。结论清金化痰汤可显著下调模型大鼠肺组织中 RORγt 蛋白表达，上调 Foxp3／RORγt，这可能是清金化痰汤调节 AECOPD 黏液高分泌的机制之一。
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全反式维甲酸抑制IL-23/IL-17通路促进小鼠移植皮肤存活的研究
目的：探讨全反式维甲酸(ATRA)灌胃对小鼠同种异基因皮肤移植存活时间的影响及白细胞介素(IL)-23、IL-17通路在其中的作用。方法以DBA/2小鼠为供者，Babl/c小鼠为受者建立皮肤移植模型。随机将受者分为对照组、小剂量组和大剂量组，分别在术前1 d至术后14 d或判定皮肤死亡之日每天给3组小鼠分别灌胃注射玉米油、10 mg/kg和30 mg/kg ATRA玉米油溶液。术后观察各组皮肤移植物存活时间，皮肤组织切片检测病理改变，酶联免疫吸附试验检测血清IL-23和IL-17水平，实时荧光定量PCR检测移植皮肤中IL-23、转录因子孤核受体（ROR）γt和IL-17 mRNA表达。结果与对照组比较，小剂量组和大剂量组皮肤移植存活时间延长（P<0.05），炎症细胞浸润及组织破坏程度轻，血清IL-23水平降低（P<0.05），而两治疗组间差异无统计学意义。对照组、小剂量组及大剂量组血清IL-17水平依次降低（P<0.05）。小剂量组和大剂量组皮肤移植物中IL-23、RORγt和IL-17 mRNA表达水平均较对照组低（P<0.05），而两治疗组间差异无统计学意义。结论 ATRA灌胃可显著延长小鼠移植皮肤存活时间，其机制可能与抑制IL-23、RORγt、IL-17 mRNA表达和蛋白分泌有关。
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特异性免疫治疗对哮喘大鼠肺组织RORγtmRNA表达的影响
目的 研究特异性免疫治疗(SIT)对哮喘大鼠肺组织维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)mRNA表达的影响及其机制.方法 将24只正常清洁级雄性SD大鼠随机分成正常对照组(C组)、 哮喘组(A组)和特异性免疫治疗组(SIT组),A组和SIT组通过卵白蛋白(OVA)致敏建立哮喘大鼠模型,SIT组再行OVA雾化吸入减敏.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-17(IL-17)及转化生长因子β1(TGF-β1)水平,采用实时荧光定量PCR方法检测肺组织RORγt mRNA表达水平.结果三组IL-17、TGF-β1和RORγt mRNA差异均有统计学意义(P<0.05).A组IL-17、TGF-β1及RORγt mRNA均高于C组(P<0.05);SIT组IL-17及TGF-β1均高于C组(P<0.05),RORγt mRNA与C组差异无统计学意义(P>0.05);SIT组IL-17和TGF-β1及RORγt mRNA均低于A组(P<0.05).RORγt mRNA与TGF-β1及IL-17均呈正相关(P<0.05).结论 SIT可能通过减少TGF-β1分泌抑制RORγt表达, 进而抑制Th17生成及IL-17分泌, 减轻气道炎症反应.
关键词： 特异性免疫治疗 哮喘 维甲酸相关孤核受体γt 白细胞介素-17 转化生长因子β1 -
五味子乙素对溃疡性结肠炎模型大鼠的干预及作用机制研究
目的:研究五味子乙素对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎( UC)大鼠的干预作用及其机制.方法:采用TNBS诱导大鼠UC模型,分别灌胃给予五味子乙素低(20 mg·kg-1)、中(40 mg·kg-1)、高(80 mg·kg-1)剂量或柳氮磺吡啶片(SASP,25 mg?kg-1)治疗7 d.末次给药24 h后处死大鼠,观察结肠组织形态变化,HE染色并进行组织病理学评分.Western Blot 和Real-time PCR法检测结肠组织中Th17特异性转录因子维甲酸相关孤核受体γt (RORγt) 和Treg特异性转录因子叉头蛋白P3(FoxP3)的表达情况.结果:与模型组相比,五味子乙素低、中、高剂量组大鼠结肠组织形态均有显著改善且病理评分显著降低(P<0. 05或P<0. 01),其中五味子乙素高剂量组的疗效为显著,与SASP组效果相当(P>0. 05);五味子高剂量组大鼠结肠组织中的FoxP3蛋白和基因水平显著升高(P<0. 05或P<0. 01),RORγt蛋白和基因表达水平显著降低(P<0. 05或P<0. 01),与SASP组效果相当(P>0. 05),均比五味子低剂量组更显著(P<0. 05或P<0. 01).结论:五味子乙素能较显著地改善结肠组织溃疡,抑制肠道炎症反应,具有一定的临床价值.其作用机制与其上调大鼠结肠组织中FoxP3的表达、降低RORγt表达有关.
关键词： 五味子乙素 溃疡性结肠炎 维甲酸相关孤核受体γt 转录因子叉头蛋白P3 -
右美托咪定通过降低IL-17和RORγt的表达降低脓毒症小鼠的肺损伤
目的 观察盲肠结扎法对小鼠血液和肺组织中白细胞介素(IL-17)和维甲酸相关孤核受体 γt(RORγt)表达的影响和右美托咪定的干预作用.方法 雄性C57BL/6小鼠32只,体重20～25 g,随机分为四组:S组(n=8)为假手术组;Dex组(n=8)为假手术加右美托咪定40μg/kg腹腔注射;Sep组(n=8)为盲肠结扎穿孔组;Sep+Dex组(n=8)为盲肠结扎穿孔加右美托咪定40μg/kg腹腔注射.24 h后用眼球放血处死小鼠,并收集小鼠的血液和肺组织.采用苏木精-伊红法(HE)染色后,在光镜下观察肺组织损伤评分;检测小鼠肺湿重/干重比(W/D);ELISA法检测血浆和肺组织中IL-17的浓度;Western blot法检测肺组织RORγt蛋白的含量.结果 S组和Dex组未见明显损伤,Sep组肺出血、充血、炎性细胞浸润明显,Sep+Dex组肺损伤程度明显减轻(P<0.01).与S组比较,Sep组小鼠外周血和肺组织W/D明显升高,IL-17浓度明显升高,肺组织中RORγt蛋白含量明显升高(P<0.05).与Sep组比较,Sep+Dex组上述指标都明显降低(P<0.05).结论 盲肠结扎模型可导致小鼠外周血和肺组织IL-17及肺组织RORγt的表达水平明显升高,而右美托咪定可通过降低IL-17和RORγt的表达减轻盲肠结扎致脓毒症小鼠肺损伤程度.
关键词： 脓毒症 右美托咪定 肺损伤 白细胞介素17 维甲酸相关孤核受体γt -
hp-MSCs对RSV引起小儿毛细支气管炎的保护作用及机制研究
目的 探讨人胎盘间充质干细胞(hp-MSCs)水平降低与毛细支气管炎发病的相关性及hP-MSCs防治毛细支气管炎的分子机制.方法 在滨州医学院附属医院产科招募志愿者,同时收集新生儿胎盘.毛细支气管炎患者由儿科医生根据临床诊断标准做出诊断;以毛细支气管炎患者为病例组,正常体检儿童为对照组,进行病例对照研究;胎盘hp-MSCs水平检测采用锥虫蓝染色计数法,hp-MSCs表面标记物的检测采用流式细胞仪方法;采用ELISA(酶联免疫吸附法)检测白细胞介素-9(IL-9)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β1 (TGFβ-1)水平,采用Real time PCR和Western blot法检测叉头框蛋白3(Foxp3)及维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)基因和蛋白表达水平.结果 两组人群在是否存在特异性皮炎、毛细支气管炎1级和2级家族史有显著性差异(P＜0.05).病例组hp-MSCs水平及其表面标记物CD44和CD29水平显著降低(P＜0.05).呼吸道合胞体病毒(RSV)感染升高IL-17和IL-9等炎症因子水平,降低IL-10和TGFβ-1等抗炎因子水平;而hp-MSCs干预可以降低IL-17和IL-9水平而升高IL-10和TGFβ-1水平(均P＜0.05).RSV感染可以下调Foxp3基因和蛋白表达,上调RORγt基因和蛋白表达;而hp-MSCs干预可以上调Foxp3基因和蛋白表达,下调RORγt基因和蛋白表达.结论 胎盘hp-MSCs水平降低是引起婴幼儿毛细支气管炎的独立危险因素,hp-MSCs通过上调Foxp3的蛋白和基因表达,以及下调RORγt蛋白和基因表达起到防治婴幼儿毛细支气管炎的作用.
