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大鼠胰腺导管来源干细胞向胰岛素分泌细胞分化的体外培养
目的:研究在体外条件下从大鼠胰腺导管分离的干细胞向胰岛素分泌细胞分化的产物细胞的形态、表型及功能.方法:采用胶原酶原位消化法消化大鼠胰腺,差异贴壁法培养出胰腺导管来源千细胞(PDSCs),对其进行形态学与表型鉴定.采用无血清培养基,添加Matrigel、exendin-4诱导干细胞向胰岛素分泌细胞分化,鉴定产物细胞的形态、表型及功能.结果:PDSCs在塑料培养皿内贴壁生长,在含血清的培养基内高度增殖,形态学上呈索形或纺锤形的成纤维样细胞,表型上是一种表达PDX-1和nestin的间充质干细胞;经无血清诱导培养,其可分化为胰岛样细胞团并释放胰岛素,但其胰岛素释放指数(SI)为1.35±0.27,明显弱于新鲜分离的胰岛,尚难满足胰岛移植的要求.血清可以促进PDSCs的增殖但抑制其分化,Matrigel与exendin-4对其分化具有促进作用.结论:PDSCs是一种表达PDX-1和nestin的间充质干细胞,可在体外向胰岛素分泌细胞分化,是一种潜在的新的胰岛来源.
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三维及二维培养大鼠胰腺导管来源干细胞的体外对比实验研究
目的 观察在不同培养模式下大鼠胰腺导管来源干细胞(PDSC)的生物学特性.方法 以大鼠胰腺组织为材料,采用动力性三维培养及传统二维培养方法进行细胞培养,获得原代PDSC,并连续传代,纯化PDSC,比较动力性三维培养及传统二维培养细胞间连接及细胞凋亡周期的差异.结果 动力性三维培养的大鼠PDSC在培养第2天即可沿三维支架贴壁生长,在第7天即可形成细胞团,并沿三维支架多向贴壁生长；二维培养的PDSC在培养第5天贴壁生长.三维培养与二维培养相比,二维培养的细胞间连接少见,三维培养的细胞连接结构丰富.三维培养与二维培养相比,三维培养的G1期细胞增多,G2期细胞相对减少(P＜0.01),三维培养早期自发凋亡细胞比例相对减少(P＜0.05),晚期自发凋亡与坏死细胞比例两种培养方式间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 动力性三维细胞培养较传统二维细胞培养,在细胞贴壁时间、细胞连接以及细胞凋亡方面具有明显的优势.
